Para que a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) possa ser usada para quantificar o DNA inicial presente na amostra, é necessário o uso de
Aum marcador capaz de fluorescer ao se ligar ao DNA.
Btranscriptase reversa.
Caminoácidos marcados.
DTaq polimerase fluorescente.
Eprimers capazes de desnaturar a 72 ºC.
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GabaritoA — um marcador capaz de fluorescer ao se ligar ao DNA.
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PCR quantitativo (qPCR): marcador fluorescente
Gabarito: letra A. Para quantificar o DNA inicial por PCR, é necessário um marcador que emita fluorescência ao se ligar ao DNA amplificado, pois a PCR em tempo real (qPCR) monitora o aumento da fluorescência a cada ciclo, permitindo determinar a quantidade inicial de alvo. Esse é o princípio fundamental da PCR quantitativa.
A questão testa o conhecimento sobre as variações da PCR. Enquanto a PCR convencional é qualitativa, a PCR em tempo real (qPCR) utiliza corantes fluorescentes (ex.: SYBR Green) ou sondas (ex.: TaqMan) para quantificar o DNA. A alternativa A descreve exatamente esse recurso.
1PCR convencionalQualitativa
2qPCR (tempo real)Quantitativa
3Marcador fluorescenteSYBR Green / TaqMan
4Fluorescência proporcional ao DNAQuantificação inicial
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Alternativa A — ✅ Correta ⟵ GABARITO
A PCR quantitativa (qPCR) baseia-se na detecção da fluorescência emitida por um intercalante de DNA (como SYBR Green) ou por uma sonda específica (TaqMan). A fluorescência gerada é proporcional à quantidade de DNA amplificado, permitindo a quantificação inicial. Sem esse marcador, a PCR fornece apenas um resultado qualitativo (presença ou ausência).
Alternativa B — ❌ Incorreta
A transcriptase reversa é utilizada na RT-PCR para converter RNA em cDNA, permitindo a amplificação de alvos de RNA. No entanto, a questão foca em quantificar DNA inicial, e não RNA. Portanto, a transcriptase reversa não é um componente necessário para a quantificação de DNA.
Alternativa C — ❌ Incorreta
Os aminoácidos marcados não fazem parte da PCR. A técnica utiliza nucleotídeos (dNTPs) como blocos de construção, e não aminoácidos. Aminoácidos marcados são usados em outras técnicas, como marcação de proteínas, mas não na amplificação de DNA.
Alternativa D — ❌ Incorreta
A Taq polimerase é a enzima termoestável que polimeriza o DNA, mas ela não é fluorescente. Embora existam variantes com modificações (como anticorpos inibidores), a fluorescência na qPCR provém de corantes ou sondas adicionados separadamente, não da própria polimerase. A alternativa confunde o marcador fluorescente com a enzima.
Alternativa E — ❌ Incorreta
Os primers (iniciadores) são oligonucleotídeos que se anelam à fita molde, não desnaturam. A desnaturação do DNA ocorre a ~94‑96 °C, e a temperatura de anelamento dos primers costuma ficar entre 55‑70 °C, conforme o cálculo da Tm. A afirmação de que primers desnaturam a 72 °C é incorreta; essa temperatura é típica da etapa de extensão. Além disso, primers comuns já são suficientes para a PCR; não há necessidade de “primers capazes de desnaturar” para quantificação.
PEGA ESSA DICA!
Para memorizar, associe PCR quantitativa (qPCR) com fluorescência. Sempre que a banca falar em “quantificar DNA inicial”, pense em marcadores fluorescentes. Já a transcriptase reversa (alternativa B) é o marcador da RT-PCR (para RNA), e não para DNA.