Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — CESPE / CEBRASPE 2022
Biologia›Moléculas, células e tecidos
Código
ce143556
Banca
CESPE / CEBRASPE
Órgão
Prefeitura de Estância - SE
Ano
2022
Nível
Superior
Cargo
Professor de Educação Básica - Área: Ciências
O Projeto Genoma teve como objetivo determinar a sequência de todo o genoma humano. Esse esforço de pesquisa internacional, custou mais de US$ 3 bilhões e levou 13 anos para ser concluído. A primeira sequência completa foi determinada em abril de 2003. O método desenvolvido por Frederick Sanger foi crucial para desenvolvimento do Projeto internacional do Genoma Humano. Considerando os princípios básicos do método de sequenciamento de DNA proposto por Sanger (e seus aperfeiçoamentos), e a figura a seguir, assinale a opção correta.Fonte: http://www.biorede.pt
ANessa figura, a sequência da molécula de DNA original obtida a partir das bandas que surgem no gel foi TGGCAATACCGG.
BO método de sequenciamento de DNA inventado por Sanger baseia-se na síntese não enzimática de DNA in vitro.
CPara que o sequenciamento seja concluído, uma sequência terminadora com algumas dezenas de pares de base de nucleotídeos é projetada para ser o ponto de interrupção da incorporação de bases à cadeia em construção.
DO método de Sanger, embora tendo sido bastante empregado no Projeto Genoma, mostrou-se de difícil automatização.
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GabaritoA — Nessa figura, a sequência da molécula de DNA original obtida a partir das bandas que surgem no gel foi TGGCAATACCGG.
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Sequenciamento de DNA pelo método de Sanger
Gabarito: letra A. A alternativa A descreve a sequência correta da molécula original (lida a partir do gel de sequenciamento), enquanto as demais contêm erros conceituais sobre o método de Sanger: ele é enzimático, não utiliza uma sequência terminadora projetada, e é amplamente automatizável.
O método de Sanger baseia-se na síntese enzimática de DNA in vitro usando DNA polimerase e didesoxinucleotídeos (ddNTPs) que terminam a elongação da cadeia quando incorporados. A reação produz fragmentos de diferentes tamanhos, que são separados por eletroforese em gel. A leitura do gel (de baixo para cima) fornece a sequência complementar à fita molde; portanto, a sequência original (molde) é o complemento reverso do que é lido. A alternativa A alega que a sequência original é TGGCAATACCGG – para ser verdadeira, essa sequência deve corresponder ao padrão de bandas da figura. Como o gabarito é A, assume-se que a figura confirma essa leitura.
Característica
Método de Sanger (correto)
Afirmativa da alternativa
Erro conceitual
Base da síntese de DNA
Enzimática (DNA polimerase)
Não enzimática (B)
Afirma que é não enzimática, quando é enzimática
Mecanismo de terminação
Incorporação aleatória de ddNTPs
Sequência terminadora pré-projetada (C)
A terminação não é por sequência, mas por ddNTPs
Automatização
Amplamente automatizável
Difícil automatização (D)
O método é facilmente automatizável
Leitura da sequência original
Complemento reverso da leitura do gel
TGGCAATACCGG (A)
Compatível com a leitura do gel (gabarito)
Alternativa A — ✅ Correta ⟵ GABARITO
A sequência apresentada é compatível com a leitura do gel mostrado na figura. No sequenciamento de Sanger, as bandas no gel representam fragmentos terminados em ddNTPs marcados; a ordem das bandas revela a sequência da fita recém-sintetizada, que é complementar à fita molde original. Assim, a sequência original é obtida por complementaridade. Se a figura indica as bandas correspondentes a essa sequência, a afirmativa está correta.
Alternativa B — ❌ Incorreta
Afirma que o método de Sanger se baseia na síntese não enzimática de DNA. Isso é falso: o método utiliza a enzima DNA polimerase para catalisar a extensão dos iniciadores e a incorporação dos nucleotídeos (incluindo os ddNTPs). É, portanto, um processo enzimático.
Alternativa C — ❌ Incorreta
Diz que é projetada uma “sequência terminadora com algumas dezenas de pares de base” para interromper a incorporação. No método de Sanger, a terminação é feita por ddNTPs que são incorporados aleatoriamente na cadeia em crescimento, não por um segmento pré-definido. Os ddNTPs carecem do grupo 3’-OH, impedindo a adição do próximo nucleotídeo e gerando fragmentos de todos os tamanhos possíveis.
Alternativa D — ❌ Incorreta
Afirma que o método de Sanger mostrou-se de difícil automatização. Historicamente, o método foi automatizado com sucesso por meio da eletroforese capilar e do uso de ddNTPs marcados com fluorescência, permitindo o sequenciamento em larga escala do Projeto Genoma Humano. Portanto, é um método altamente automatizável.
PEGA ESSA DICA!
No sequenciamento de Sanger, lembre-se dos três pilares: (1) uso de DNA polimerase – é enzimático; (2) terminação com ddNTPs – não há sequência terminadora prévia; (3) automatização bem-sucedida – foi o método principal do Projeto Genoma. A leitura do gel é complementar à fita molde; a sequência original é o complemento reverso da leitura.
Conclusão: A única alternativa correta é a letra A, conforme a figura fornecida pela banca. As demais alternativas apresentam erros conceituais básicos sobre o método de Sanger.
Fonte: http://www.biorede.pt