Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — CESPE / CEBRASPE 2024

Marcadores de viabilidade celular em ensaios pré-clínicos

❌ ERRADO. A afirmativa mistura marcadores de processos celulares distintos: Ki-67 é um marcador de proliferação celular, anexina-V é um marcador de apoptose (fase inicial), e Bcl-2 é uma proteína anti-apoptótica — nenhum deles é utilizado para avaliar diretamente a redução da viabilidade celular. Para essa finalidade, os ensaios clássicos são o MTT, o azul de tripano e a exclusão por iodeto de propídio, que medem a integridade metabólica ou de membrana das células.

A questão cobra o conhecimento de marcadores biológicos e sua aplicação em ensaios pré-clínicos de citotoxicidade. É fundamental distinguir os processos celulares que cada marcador identifica, pois a banca explora justamente a confusão entre proliferação, morte celular e viabilidade.

O que é viabilidade celular? É a capacidade de uma célula permanecer viva e funcional. Em ensaios de citotoxicidade, avalia-se se uma droga reduz o número de células vivas, seja por necrose, apoptose ou inibição da proliferação. Os métodos mais comuns medem:

• Integridade da membrana: corantes como azul de tripano e iodeto de propídio penetram apenas em células mortas.

• Atividade metabólica: o MTT é convertido por enzimas mitocondriais de células vivas em um produto colorido, quantificável por espectrofotometria.

• Liberação de enzimas citoplasmáticas: como a LDH, que extravasa quando a membrana se rompe.

O que cada marcador citado realmente indica?

• Ki-67: proteína nuclear expressa durante todas as fases ativas do ciclo celular (G1, S, G2 e M), ausente em células quiescentes (G0). É um marcador de proliferação, não de viabilidade. Uma droga que inibe a proliferação pode reduzir o número de células, mas isso não é o mesmo que avaliar a viabilidade diretamente.

• Anexina-V: proteína que se liga à fosfatidilserina, um fosfolipídeo que se externaliza na membrana durante a apoptose precoce. É um marcador de apoptose, um tipo específico de morte celular programada, não de viabilidade geral.

• Bcl-2: proteína anti-apoptótica que regula a via intrínseca da apoptose, inibindo a liberação de citocromo c pela mitocôndria. Sua expressão indica resistência à morte celular, mas não é um marcador direto de viabilidade.

Por que a afirmativa está errada? Ela agrupa marcadores de processos diferentes como se todos servissem para avaliar a redução da viabilidade celular. Embora a anexina-V e o Bcl-2 estejam relacionados à morte celular, eles não medem a viabilidade em si; o Ki-67 mede proliferação, não viabilidade. A redução da viabilidade é avaliada por ensaios funcionais como MTT, resazurina, azul de tripano ou iodeto de propídio.

Gabarito: letra E (ERRADO).