Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — CESPE / CEBRASPE 2024
Biologia›Moléculas, células e tecidos
Código
ce174459
Banca
CESPE / CEBRASPE
Órgão
INPI
Ano
2024
Nível
Superior
Cargo
Pesquisador Em Propriedade Industrial – Área: P2- Bioquímica / Imunologia / Biologia Celular E Molecular / Biotecnologia / Microbiologia
Os grandes avanços na biologia molecular observados nas últimas décadas partem de princípios e métodos simples, que foram progressivamente aprimorados, o que permitiu as manipulações genéticas observadas atualmente. Tendo em conta as principais abordagens em biologia molecular, julgue o item que se segue.O método conhecido como sequenciamento Illumina envolve a ação de uma polimerase que adiciona nucleotídeos marcados e bloqueados a uma fita; porém, tanto a marcação quanto o bloqueio são removidos após a adição, o que permite que a polimerase continue a adicionar resíduos.
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GabaritoC — Certo
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Sequenciamento Illumina: princípio da síntese com terminadores reversíveis
Gabarito: letra C (CERTO). O sequenciamento Illumina é um método de segunda geração (NGS) que se baseia na síntese de uma fita complementar pela DNA polimerase, utilizando nucleotídeos modificados que carregam simultaneamente um marcador fluorescente e um grupo bloqueador da extremidade 3'. Após a incorporação de cada nucleotídeo, tanto o fluoróforo quanto o bloqueador são removidos quimicamente, permitindo que a polimerase continue adicionando os próximos resíduos — exatamente o que o enunciado descreve.
O Illumina é um dos principais representantes do sequenciamento de nova geração (NGS), ao lado de 454 Roche, Ion Torrent, PacBio e Nanopore. A característica central dessa técnica é o uso de terminadores reversíveis: cada nucleotídeo é adicionado com um bloqueio na extremidade 3' que impede a incorporação de mais de um nucleotídeo por ciclo, garantindo a leitura base a base. A detecção da fluorescência emitida por cada base incorporada é feita por imagem, e a remoção do bloqueio e do fluoróforo permite o próximo ciclo. Esse processo é repetido milhares de vezes, gerando milhões de leituras em paralelo, o que confere ao método alto rendimento e precisão.
A banca explora aqui um ponto técnico específico: a diferença entre o Illumina e outros métodos de segunda geração, como o Ion Torrent, que detecta a variação de pH causada pela liberação de H+ durante a incorporação, sem usar nucleotídeos marcados com fluorescência. No Illumina, a marcação fluorescente é essencial para a identificação da base incorporada, e o bloqueio reversível é o que permite o sequenciamento cíclico. A afirmação do enunciado está correta ao descrever esses dois elementos — marcação e bloqueio — e sua remoção após cada adição.
1Polimerase adiciona nucleotídeo marcado e bloqueado
2Detecção da fluorescência (imagem)
3Remoção do fluoróforo e do bloqueio
4Novo ciclo de adição
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Alternativa C — ✅ CERTO ⟵ GABARITO
A afirmativa descreve com precisão o mecanismo do sequenciamento Illumina: a DNA polimerase adiciona nucleotídeos marcados e bloqueados a uma fita em crescimento; após a incorporação, a marcação fluorescente é detectada e, em seguida, tanto o fluoróforo quanto o grupo bloqueador são removidos, permitindo que a polimerase continue a síntese. Esse ciclo se repete até que a sequência completa seja determinada. O texto do enunciado está tecnicamente correto e reflete o princípio dos terminadores reversíveis, característico do Illumina.
PEGA ESSA DICA!
Para diferenciar os métodos de NGS, lembre-se: Illumina = nucleotídeos com fluoróforo + bloqueio reversível (detecção por fluorescência); Ion Torrent = detecção de variação de pH (sem fluorescência); PacBio = sequenciamento em tempo real de molécula única com fluoróforos; Nanopore = passagem da fita por nanoporo com detecção de alteração de corrente elétrica. Essa distinção é frequentemente cobrada em provas de biologia molecular.