Questão de Biologia — Identidade dos seres vivos — CESPE / CEBRASPE 2024
Biologia›Identidade dos seres vivos
Código
ce174514
Banca
CESPE / CEBRASPE
Órgão
INPI
Ano
2024
Nível
Superior
Cargo
Pesquisador Em Propriedade Industrial – Área: P2- Bioquímica / Imunologia / Biologia Celular E Molecular / Biotecnologia / Microbiologia
Tendo como referência a figura precedente, que ilustra uma estrutura de anticorpos que possuem ligações dissulfeto entre as cadeias leves e pesadas, julgue o item a seguir.As mencionadas biomoléculas são passíveis de purificação por cromatografia de afinidade que apresente, covalentemente ligados à fase estacionária, anticorpos secundários que reconheçam tais moléculas.
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GabaritoC — Certo
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Cromatografia de afinidade e purificação de anticorpos
Gabarito: ✅ CERTO. A cromatografia de afinidade é uma técnica de separação baseada na interação específica e reversível entre uma biomolécula (o analito) e um ligante imobilizado na fase estacionária. Como os anticorpos possuem sítios de ligação específicos (parátopos) que reconhecem antígenos, é perfeitamente possível utilizar anticorpos secundários (anti-imunoglobulinas) covalentemente ligados a uma matriz sólida para purificar anticorpos primários de uma mistura complexa.
O princípio fundamental dessa técnica reside na alta especificidade biológica. No caso descrito, a fase estacionária é preparada com anticorpos secundários que reconhecem a região constante (Fc) ou outras porções do anticorpo primário que se deseja purificar. Quando a amostra contendo a mistura de proteínas passa pela coluna, o anticorpo de interesse liga-se seletivamente ao anticorpo secundário imobilizado, enquanto as demais proteínas, que não possuem afinidade, são eluídas com o tampão de lavagem. Posteriormente, altera-se o pH ou a força iônica do tampão de eluição para romper a interação antígeno-anticorpo, permitindo a recuperação do anticorpo purificado.
Essa metodologia é amplamente utilizada em laboratórios de biologia molecular e imunologia, sendo uma das formas mais eficientes de obter anticorpos com alto grau de pureza. A ligação covalente do anticorpo secundário à fase estacionária (como esferas de agarose ou sílica) é crucial para garantir que o ligante não seja removido durante o processo de eluição, mantendo a estabilidade da coluna para múltiplos usos.
1Amostra passa pela coluna
2Anticorpo liga-se ao secundário
3Lavagem remove impurezas
4Eluição recupera anticorpo
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PEGA ESSA DICA!
A cromatografia de afinidade é a técnica de escolha quando se busca pureza elevada a partir de fontes biológicas complexas (como soro ou sobrenadante de cultura celular). Lembre-se de que o sucesso da purificação depende da força da interação entre o anticorpo imobilizado e o alvo; se a interação for muito forte, a eluição pode exigir condições drásticas que desnaturam a proteína, por isso o controle do pH é o parâmetro mais crítico no método.
Tendo como referência a figura precedente, que ilustra uma estrutura de anticorpos que possuem ligações dissulfeto entre as cadeias leves e pesadas, julgue o item a seguir.As mencionadas biomoléculas são passíveis de purificação por cromatografia de afinidade que apresente, covalentemente ligados à fase estacionária, anticorpos secundários que reconheçam tais moléculas.