Questão de Biomedicina - Análises Clínicas — Biologia Molecular em Biomedicina — CESPE / CEBRASPE 2025

Sequenciamento de alta profundidade do transcritoma (RNA-Seq)

Gabarito: CERTO. O sequenciamento de alta profundidade do transcritoma (RNA-Seq) permite identificar e quantificar os transcritos (RNA mensageiro) expressos em uma planta, possibilitando a comparação entre genótipos resistentes e suscetíveis a um patógeno e, assim, a identificação de genes candidatos relacionados à resistência ou suscetibilidade. Essa é uma aplicação clássica da transcriptômica em fitopatologia molecular.

O transcritoma é o conjunto completo de moléculas de RNA transcritas a partir do genoma de um organismo em um determinado momento e condição. O sequenciamento de alta profundidade, também conhecido como RNA-Seq, é uma técnica de sequenciamento de nova geração (NGS) que permite analisar o transcritoma de forma abrangente e quantitativa. A alta profundidade de sequenciamento garante que mesmo transcritos pouco abundantes sejam detectados e quantificados com precisão.

A lógica por trás da afirmação é a seguinte: quando uma planta é infectada por um patógeno, ocorre uma reprogramação massiva da expressão gênica. Genes envolvidos na defesa da planta (resistência) são induzidos, enquanto genes que podem ser explorados pelo patógeno (suscetibilidade) podem ter sua expressão alterada. Ao sequenciar o transcritoma de plantas resistentes e suscetíveis, antes e após a infecção, é possível identificar quais genes são diferencialmente expressos entre essas condições. Esses genes diferencialmente expressos são fortes candidatos a estarem envolvidos na resistência ou suscetibilidade da planta ao patógeno.

Na prática, um experimento típico envolve: (1) extrair o RNA total de amostras de plantas resistentes e suscetíveis, em condições de controle e de infecção; (2) converter o RNA em cDNA (DNA complementar) e preparar a biblioteca de sequenciamento; (3) sequenciar as bibliotecas em alta profundidade; (4) alinhar as sequências obtidas (reads) ao genoma de referência da planta ou montar um transcritoma de novo; e (5) quantificar a expressão de cada gene e realizar a análise de expressão diferencial. Os genes com expressão significativamente alterada entre os grupos são os candidatos a estarem relacionados à resistência ou suscetibilidade.

A distinção importante aqui é entre o sequenciamento do genoma (DNA) e o sequenciamento do transcritoma (RNA). O genoma é estático e contém toda a informação genética, enquanto o transcritoma é dinâmico e reflete quais genes estão ativos em um dado momento. Para estudar a resposta de uma planta a um patógeno, o transcritoma é a abordagem mais informativa, pois captura as mudanças na expressão gênica que ocorrem durante a interação planta-patógeno.

A pegadinha que a banca poderia explorar seria confundir o sequenciamento do transcritoma com o sequenciamento do genoma. O sequenciamento do genoma revela a sequência de DNA, mas não informa diretamente quais genes estão sendo expressos em resposta à infecção. O transcritoma, por sua vez, é a ferramenta adequada para essa análise funcional. A afirmação está correta porque descreve exatamente essa aplicação da transcriptômica.

Guarde a fronteira entre genoma (DNA, estático) e transcritoma (RNA, dinâmico): é exatamente nela que a questão se resolve. A identificação de genes relacionados à resistência ou suscetibilidade a um patógeno é feita pela análise da expressão gênica, que é o domínio do transcritoma.

Item — ✅ CERTO

A afirmação está correta. O sequenciamento de alta profundidade do transcritoma (RNA-Seq) é uma técnica consolidada para identificar genes diferencialmente expressos entre condições, como plantas resistentes e suscetíveis a um patógeno. Ao comparar os perfis de expressão gênica, é possível apontar genes candidatos que participam dos mecanismos de resistência ou suscetibilidade. A alta profundidade garante a detecção de transcritos raros e a quantificação precisa da expressão, tornando a técnica adequada para esse fim.

Gabarito: CERTO