Questão de Biomedicina - Análises Clínicas — Biologia Molecular em Biomedicina — CESPE / CEBRASPE 2025

Methylation-specific PCR (MSP) e o tratamento com bissulfito de sódio

Gabarito: ✅ CERTO. Na técnica de MSP, o tratamento do DNA com bissulfito de sódio converte citosinas não metiladas em uracil, enquanto as citosinas metiladas permanecem inalteradas — essa diferença química é exatamente o que permite distinguir, por PCR, o DNA metilado do não metilado. A afirmação do enunciado descreve corretamente o princípio fundamental da técnica.

A metilação do DNA é uma das marcas epigenéticas mais estudadas e consiste na adição covalente de um grupo metil à posição 5 do anel da citosina, formando a 5-metilcitosina. Esse evento ocorre predominantemente em ilhas CpG — regiões ricas em dinucleotídeos citosina-guanina — e está associado ao silenciamento gênico. Para estudar esse padrão de metilação, uma das estratégias mais utilizadas é a conversão química do DNA por bissulfito de sódio, que é a base da técnica de MSP.

O tratamento com bissulfito de sódio promove a desaminação das citosinas não metiladas, convertendo-as em uracil. As citosinas metiladas, por sua vez, são protegidas dessa conversão e permanecem como citosina. Após a conversão, o DNA é submetido à PCR com dois pares de iniciadores (primers) específicos: um par desenhado para reconhecer a sequência contendo citosinas (que indica DNA metilado) e outro par para reconhecer a sequência contendo uracilas (que indica DNA não metilado). Assim, a presença de produto de amplificação com um ou outro par de primers revela o status de metilação da região analisada.

Na prática, imagine uma amostra de DNA tumoral em que se deseja verificar se o promotor de um gene supressor de tumor está metilado. Após o tratamento com bissulfito, se o gene estiver metilado, os primers específicos para a sequência metilada amplificam; se não estiver, os primers para a sequência não metilada amplificam. Essa diferenciação é possível justamente porque o bissulfito converte citosinas não metiladas em uracil, criando sequências distintas que podem ser distinguidas por PCR.

A pegadinha que a banca poderia explorar seria inverter o efeito do bissulfito, afirmando que ele converte citosinas metiladas em uracil — o que é incorreto. A conversão atinge apenas as citosinas não metiladas; as metiladas permanecem intactas. O enunciado, no entanto, descreve corretamente o processo, sem cair nessa armadilha.

✅ CERTO.