Questão de Farmácia — Biologia Molecular e Biotecnologia — CESPE / CEBRASPE 2025
Farmácia›Biologia Molecular e Biotecnologia
Código
ce202412
Banca
CESPE / CEBRASPE
Órgão
EMBRAPA
Ano
2025
Nível
Médio
Cargo
Técnico – Área: Laboratório E Campos Experimentais – Subárea: Laboratório
Um laboratório de biologia molecular está realizando
um projeto para identificar a expressão de genes específicos em
tecidos
vegetais
sob
diferentes
condições de estresse.
As amostras de tecido foliar precisam ser coletadas em campo,
transportadas por período prolongado ao laboratório e
processadas para a extração de RNA de alta qualidade,
preservando-se sua integridade. Além disso, é necessário preparar
um tampão de lise e assegurar que todos os materiais utilizados
estejam devidamente esterilizados para evitar contaminação.
A qualidade do RNA extraído será fundamental para os
resultados subsequentes das análises de expressão gênica.
A partir das informações apresentadas nessa situação hipotética, julgue o item a seguir.Para a extração de RNA total, as folhas devem ser imediatamente congeladas em nitrogênio líquido após a coleta e maceradas ainda congeladas, sendo necessário o tratamento prévio da vidraria com dietilpirocarbonato (DEPC) para que se assegure a utilização de material livre de RNases.
CCerto
EErrado
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GabaritoC — Certo
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Extração de RNA total: congelamento em nitrogênio líquido e tratamento com DEPC
Gabarito: Certo (C). A afirmativa está correta porque, para preservar a integridade do RNA, as amostras de tecido vegetal devem ser imediatamente congeladas em nitrogênio líquido após a coleta e maceradas ainda congeladas, e a vidraria deve ser tratada com dietilpirocarbonato (DEPC) para inativar RNases, enzimas que degradam o RNA. Esse é um procedimento padrão em biologia molecular, conforme descrito na situação hipotética.
O RNA é uma molécula extremamente instável, e sua degradação é acelerada por enzimas chamadas RNases, que estão presentes em praticamente todos os ambientes, incluindo superfícies de vidraria, mãos e poeira. Por isso, a extração de RNA de alta qualidade exige cuidados rigorosos desde o momento da coleta até o processamento da amostra. O congelamento imediato em nitrogênio líquido (-196 °C) é essencial para interromper a atividade enzimática e os processos metabólicos que degradariam o RNA, preservando sua integridade. A maceração ainda congelada, geralmente com auxílio de cadinho e pistilo previamente resfriados, garante que o tecido seja rompido sem que ocorra descongelamento, o que poderia reativar as RNases.
O tratamento da vidraria com DEPC é outra etapa crucial. O DEPC é um agente químico que inativa as RNases por modificação covalente de seus resíduos de histidina, eliminando a contaminação por essas enzimas. A vidraria é tratada com uma solução de DEPC (geralmente 0,1%) e depois autoclavada para remover o excesso do reagente, que poderia interferir nas reações posteriores. Esse procedimento assegura que o material utilizado na extração esteja livre de RNases, evitando a degradação do RNA durante o processo.
A situação hipotética descreve exatamente esse cenário: coleta de tecido foliar em campo, transporte prolongado e processamento para extração de RNA de alta qualidade. A afirmativa reproduz fielmente os procedimentos recomendados para garantir a integridade do RNA, sendo, portanto, correta.
A pegadinha desta questão é que ela mistura conceitos de biossegurança e esterilização com os cuidados específicos da biologia molecular. O candidato pode confundir o tratamento com DEPC com métodos de esterilização convencionais, como calor ou óxido de etileno, mas o DEPC é um inibidor de RNases, não um esterilizante geral. A banca explora essa distinção para testar o conhecimento específico do aluno sobre os cuidados com RNA.
1Congelar em N₂ líquido
2Macerar ainda congelado
3Tratar vidraria com DEPC
4Inativar RNases
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Alternativa C — ✅ Certo ⟵ GABARITO
A afirmativa está correta. O congelamento imediato em nitrogênio líquido após a coleta é o procedimento padrão para preservar a integridade do RNA, pois inativa as RNases e interrompe o metabolismo celular. A maceração ainda congelada evita o descongelamento, que poderia reativar as enzimas degradativas. O tratamento prévio da vidraria com DEPC é necessário para inativar RNases contaminantes, garantindo que o material esteja livre dessas enzimas. Esses procedimentos são essenciais para a extração de RNA de alta qualidade, conforme descrito na situação hipotética.