Questão de Biologia — Imunoglobulinas e Antígenos — CESPE / CEBRASPE 2024

Cromatografia de afinidade e purificação de anticorpos

Gabarito: ✅ CERTO. A afirmativa está correta porque a cromatografia de afinidade é uma técnica de purificação que explora a interação específica entre uma biomolécula e um ligante imobilizado na fase estacionária — e, no caso, anticorpos secundários que reconhecem os anticorpos de interesse podem ser covalentemente ligados à coluna para capturá-los seletivamente. A figura ilustra a estrutura típica de um anticorpo (imunoglobulina), com duas cadeias pesadas e duas leves unidas por pontes dissulfeto, e é exatamente essa molécula que pode ser purificada por essa abordagem.

A cromatografia de afinidade é um método de separação baseado na interação biológica específica e reversível entre a molécula de interesse e um ligante acoplado à fase estacionária (a matriz da coluna). No caso de anticorpos, o ligante pode ser um antígeno, a proteína A ou G (que se ligam à região Fc), ou ainda um anticorpo secundário — um anticorpo que reconhece e se liga ao anticorpo primário (o alvo da purificação). Esse anticorpo secundário é imobilizado covalentemente na matriz, e quando a amostra contendo os anticorpos primários passa pela coluna, eles ficam retidos pela interação antígeno-anticorpo. Depois, a eluição é feita alterando o pH ou a força iônica do tampão, rompendo a interação e liberando o anticorpo purificado.

A figura mencionada no enunciado mostra a estrutura de um anticorpo: duas cadeias pesadas (maiores) e duas cadeias leves (menores), unidas por pontes dissulfeto (-S-S-), formando a clássica forma de Y. As regiões variáveis (V) nas extremidades dos braços são os sítios de ligação ao antígeno, enquanto as regiões constantes (C) compõem o restante da molécula. Essa estrutura é o que permite a interação específica com o anticorpo secundário na cromatografia de afinidade.

A pegadinha que a banca poderia explorar aqui é a confusão entre cromatografia de afinidade e outras técnicas, como a eletroforese (que separa por carga e tamanho) ou a cromatografia de exclusão molecular (que separa por tamanho). A afinidade, ao contrário, separa pela especificidade de ligação — é a técnica mais indicada quando se quer purificar uma biomolécula com alta seletividade, como anticorpos. O enunciado descreve exatamente essa aplicação: usar anticorpos secundários imobilizados para capturar os anticorpos de interesse.

Guarde o princípio central: na cromatografia de afinidade, o que decide a separação é a interação específica entre a molécula-alvo e o ligante imobilizado. É esse critério que torna a afirmativa correta — e é o mesmo critério que você deve usar para distinguir essa técnica das demais em outras questões.

Item — ✅ Correto ⟵ GABARITO

A afirmativa está correta. A cromatografia de afinidade é uma técnica de purificação que se baseia na interação específica e reversível entre a biomolécula de interesse e um ligante imobilizado na fase estacionária. No caso descrito, os anticorpos secundários são covalentemente ligados à matriz da coluna e reconhecem especificamente os anticorpos (as biomoléculas ilustradas na figura), retendo-os enquanto outras proteínas passam. Esse é um uso clássico e correto da técnica, amplamente empregado em laboratórios para purificar imunoglobulinas.

A figura reforça o contexto: a estrutura de anticorpo com cadeias pesadas e leves unidas por pontes dissulfeto é exatamente o tipo de molécula que pode ser purificada por afinidade usando anticorpos secundários como ligantes. A especificidade da interação antígeno-anticorpo é o fundamento da técnica, e o enunciado descreve precisamente essa aplicação.

Gabarito: ✅ CERTO.