Questão de Biologia — Métodos de separação de proteínas — CESPE / CEBRASPE 2024
Biologia›Métodos de separação de proteínas
Código
ce398806
Banca
CESPE / CEBRASPE
Órgão
INPI
Ano
2024
Cargo
PPI ( )
Uma proteína específica presente em uma solução que contém uma mistura de cinco proteínas foi analisada com o objetivo de se caracterizar a massa molecular, o ponto isoelétrico, a composição de aminoácidos e a sequência de aminoácidos dessa proteína. O sequenciamento deve determinar pelo menos 30% da estrutura primária. O método de separação e análise utilizado para atingir tal objetivo permitiu o isolamento da proteína de interesse, separando-a das outras quatro proteínas, além de sua visualização por meio de marcação com prata e uma estimativa de sua massa molecular. A amostra contendo a proteína isolada por esse método foi dividida em alíquotas, denominadas I, II e III. Acerca dessa situação hipotética, julgue o item a seguir. Considere-se que a alíquota III teve a proteína clivada por ação da tripsina e que os peptídeos resultantes foram aplicados em um sistema que permitiu sua separação cromatográfica seguida por aplicação em sistema de ionização por eletropulverização, análise em quadrupolos, fragmentação, análise dos fragmentos em quadrupolos e detecção dos componentes ionizados. Nesse caso, o método de análise após a separação cromatográfica é denominadoespectrometria de massa por dessorção a laser e análise por tempo de voo.
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GabaritoE — Errado
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Espectrometria de massas: ESI-MS/MS × MALDI-TOF
Gabarito: ❌ ERRADO. O método descrito na alíquota III — separação cromatográfica, ionização por eletropulverização (ESI), análise em quadrupolos, fragmentação e nova análise em quadrupolos — é a espectrometria de massas em tandem (MS/MS) com ionização por electrospray (ESI-MS/MS), e não a espectrometria de massas por dessorção a laser assistida por matriz e análise por tempo de voo (MALDI-TOF). A banca trocou o princípio de ionização (eletropulverização por dessorção a laser) e o analisador (quadrupolos por tempo de voo).
A espectrometria de massas é uma técnica analítica que mede a razão massa/carga (m/z) de íons em fase gasosa, permitindo determinar a massa molecular de proteínas e, quando acoplada à fragmentação, obter informações de sequência. Existem diferentes fontes de ionização e diferentes analisadores de massa, e a combinação deles define o nome do método. A questão descreve com precisão uma configuração específica — ESI acoplado a um espectrômetro de massas do tipo triplo quadrupolo (QqQ), que realiza MS/MS — e o item a denomina incorretamente como MALDI-TOF.
A ionização por eletropulverização (ESI) é uma técnica de ionização "suave" que gera íons diretamente de uma solução, sendo ideal para acoplar à cromatografia líquida (LC-MS). Já a dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) é uma técnica de ionização que utiliza um laser pulsado para dessorver e ionizar a amostra co-cristalizada com uma matriz, sendo tipicamente acoplada a um analisador de tempo de voo (TOF). O analisador de quadrupolos, por sua vez, filtra íons com base em sua razão m/z, e em um triplo quadrupolo, o primeiro quadrupolo seleciona o íon precursor, o segundo (colisão) o fragmenta, e o terceiro analisa os fragmentos — configurando a espectrometria de massas em tandem (MS/MS).
A pegadinha central é a troca dos componentes: a banca descreve corretamente o fluxo ESI-MS/MS e o nomeia como MALDI-TOF, que é uma técnica com fonte de ionização e analisador completamente diferentes. O candidato que conhece as siglas, mas não associa cada uma ao seu princípio físico, cai no erro. Para a prova, é essencial dominar a arquitetura de cada técnica: ESI (ionização em solução) + quadrupolo (filtro de massa) = ESI-MS; MALDI (dessorção a laser) + TOF (tempo de voo) = MALDI-TOF.
NÃO CAIA NESSA!
A banca descreve com precisão o fluxo de um ESI-MS/MS (eletropulverização + quadrupolos + fragmentação) e o nomeia como MALDI-TOF. A confusão é entre a fonte de ionização (ESI × MALDI) e o analisador (quadrupolo × TOF). Memorize o par: ESI anda com quadrupolo; MALDI anda com TOF. Com esse par fixado, você desarma a troca na hora.
Técnica
Fonte de Ionização
Analisador
Princípio de Separação
Aplicação Típica
ESI-MS/MS (descrito no item)
Eletropulverização (ESI) — íons a partir de solução
Triplo quadrupolo (QqQ)
Filtro de m/z + fragmentação em tandem (MS/MS)
Sequenciamento de peptídeos, LC-MS, proteômica
MALDI-TOF (citado no item)
Dessorção a laser assistida por matriz (MALDI)
Tempo de voo (TOF)
Medida do tempo de voo dos íons (m/z)
Identificação de proteínas intactas, análise de massa molecular
Espectrometria de massas
1ESI-MS/MS (descrito no item)
Ionização por eletropulverização (ESI)
Analisador: triplo quadrupolo
Fragmentação em tandem (MS/MS)
2MALDI-TOF (citado no item)
Ionização por dessorção a laser
Analisador: tempo de voo (TOF)
Sem fragmentação em tandem
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Item — ❌ ERRADO
O item afirma que o método descrito é "espectrometria de massa por dessorção a laser e análise por tempo de voo". Isso está errado por dois motivos: a fonte de ionização descrita é a eletropulverização (ESI), não a dessorção a laser (MALDI); e o analisador descrito é o quadrupolo, não o tempo de voo (TOF). O fluxo correto — cromatografia → ESI → quadrupolo → fragmentação → quadrupolo → detecção — é a assinatura de um espectrômetro de massas em tandem (MS/MS), tipicamente um triplo quadrupolo. O MALDI-TOF, por sua vez, usa laser para ionizar e mede o tempo que os íons levam para percorrer um tubo de voo, sem quadrupolos e sem fragmentação em tandem.