Questão de Biologia — Métodos de Identificação de Bactérias — CESPE / CEBRASPE 2025

Coloração de Gram: o efeito do álcool na parede celular

Gabarito: letra E (ERRADO). A afirmação está incorreta porque, na coloração de Gram, o álcool (agente descorante) atua de forma oposta à descrita: nas bactérias gram-negativas, o álcool dissolve os lipídios da membrana externa e aumenta a permeabilidade da parede celular, permitindo a saída do complexo cristal violeta-iodo; nas gram-positivas, a espessa camada de peptidoglicano é desidratada pelo álcool, o que fecha os poros e retém o corante. Portanto, o fechamento dos poros ocorre nas gram-positivas, não nas gram-negativas.

A coloração de Gram é uma técnica de diferenciação bacteriana baseada na estrutura da parede celular. Ela envolve quatro etapas: (1) aplicação do corante primário cristal violeta; (2) adição do mordente lugol (iodo), que forma um complexo cristal violeta-iodo; (3) descoramento com álcool ou acetona; e (4) contracoloração com safranina ou fucsina. O resultado final depende da capacidade da parede de reter ou liberar o complexo corado durante a etapa de descoramento.

A diferença crucial está na composição da parede celular. As bactérias gram-positivas possuem uma camada espessa de peptidoglicano (cerca de 20 a 80 nm), sem membrana externa. As gram-negativas possuem uma camada fina de peptidoglicano (cerca de 2 a 7 nm) e uma membrana externa rica em lipopolissacarídeos e fosfolipídios. Quando o álcool é aplicado, ele desidrata o peptidoglicano das gram-positivas, fazendo com que os poros da parede se fechem e o complexo cristal violeta-iodo fique retido. Já nas gram-negativas, o álcool dissolve os lipídios da membrana externa, criando poros ou aumentando a permeabilidade, o que permite a saída do complexo corado. Por isso, após a contracoloração, as gram-positivas aparecem roxas e as gram-negativas, rosas.

Um exemplo prático: Escherichia coli (gram-negativa) perde o cristal violeta na etapa do álcool e adquire a cor rosa da safranina; Staphylococcus aureus (gram-positiva) retém o cristal violeta e permanece roxa. Essa distinção é fundamental para a identificação presuntiva de bactérias e para a escolha de antibióticos, já que a permeabilidade da parede influencia a ação de muitos fármacos.

A pegadinha da banca está em inverter o efeito do álcool: ela atribui às gram-negativas o comportamento que é típico das gram-positivas. O candidato que memoriza apenas o resultado final (gram-negativas ficam rosas) pode não perceber o erro no mecanismo descrito. Guarde a regra: álcool desidrata e fecha poros nas gram-positivas; dissolve lipídios e abre poros nas gram-negativas.

Item — ❌ ERRADO

A afirmação diz que "as bactérias gram-negativas têm sua parede celular desidratada pelo álcool, o que promove o fechamento dos poros na parede celular". Isso está errado por dois motivos: (1) a desidratação e o fechamento dos poros ocorrem nas gram-positivas, devido à espessa camada de peptidoglicano; (2) nas gram-negativas, o álcool dissolve os lipídios da membrana externa, aumentando a permeabilidade e permitindo a saída do complexo cristal violeta-iodo. Portanto, o mecanismo descrito é exatamente o oposto do que realmente acontece.

Gabarito: letra E (ERRADO).