Para avaliar a sensibilidade de uma amostra a determinado antibiótico, pelo teste de microaglutinação, um técnico precisou fazer uma diluição seriada log2 de determinado antimicrobiano. O protocolo recomendava que o teste fosse feito em 7 diluições partindo de uma concentração de 64μg/mL, com volume de 5mL por tubo. A figura abaixo ilustra as diluições necessárias para realização do teste. Com base nesta situação problema, analise as afirmativas a seguir e assinale (V) para a verdadeira e (F) para a falsa. ( ) Para executar este protocolo, o técnico pode preparar a solução de concentração 64μg/mL em um volume de 10mL no tubo 1, retirar 5mL desta solução e acrescentar em 5mL de diluente no tubo 2 para atingir a próxima concentração. Em seguida, deve repetir este procedimento, retirando 5mL do tubo 2 e acrescentar no seguinte que contêm 5mL de diluente. Este procedimento deve ser repetido até o tubo 7, onde os 5mL em excesso devem ser descartados. ( ) Uma alternativa para preparar uma solução de concentração 64μg/mL é preparar uma solução estoque, utilizando 6,4mg do antimicrobiano diluído em 1mL de diluente, e diluir 10μL da solução estoque em 9,99mL de diluente. ( ) As concentrações de antimicrobianos nos tubos 2, 3, 4, 5, 6, e 7 são respectivamente 32μg/mL,16μg/mL, 8μg/mL, 4μg/mL, 2μg/mL e 1μg/mL. As afirmativas são, respectivamente,
AF – V – F.
BF – V – V.
CV – F – V.
DV – F – F.
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GabaritoC — V – F – V.
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Diluição seriada log2 e preparo de soluções em testes de sensibilidade antimicrobiana
Gabarito: letra C — sequência V – F – V. A primeira afirmativa descreve corretamente o procedimento de diluição seriada 1:2 (fator 2) a partir de 64 μg/mL, com descarte do excesso no último tubo; a segunda afirmativa está incorreta porque a diluição proposta (10 μL de estoque em 9,99 mL) resulta em concentração de 64 μg/mL, e não em uma diluição da solução estoque; a terceira afirmativa está correta, pois as concentrações nos tubos 2 a 7 seguem a progressão geométrica de razão 1/2: 32, 16, 8, 4, 2 e 1 μg/mL.
A diluição seriada é uma técnica fundamental em laboratórios de microbiologia e análises clínicas, utilizada para reduzir progressivamente a concentração de uma substância (como um antimicrobiano) em uma solução. No caso específico do teste de microaglutinação para avaliar a sensibilidade de uma amostra a um antibiótico, o objetivo é determinar a menor concentração do antimicrobiano capaz de inibir o crescimento do microrganismo — a chamada Concentração Inibitória Mínima (CIM).
A diluição seriada log2, também chamada de diluição de fator 2 ou diluição 1:2, consiste em transferir um volume fixo da solução mais concentrada para um tubo contendo o mesmo volume de diluente, homogeneizar e repetir o processo sucessivamente. Cada transferência reduz a concentração pela metade, pois o volume final em cada tubo é o dobro do volume transferido, e a quantidade de soluto permanece a mesma. Por exemplo, partindo de 64 μg/mL, ao transferir 5 mL para 5 mL de diluente, a concentração cai para 32 μg/mL; repetindo, chega-se a 16 μg/mL, e assim por diante.
A segunda afirmativa explora um erro comum de cálculo: preparar uma solução estoque de 6,4 mg/mL e diluir 10 μL em 9,99 mL. Vamos calcular: 10 μL de estoque contém 10 μL × 6,4 mg/mL = 64 μg. Diluindo em 9,99 mL (total de 10 mL), a concentração final é 64 μg / 10 mL = 6,4 μg/mL, e não 64 μg/mL. Para obter 64 μg/mL, seria necessário diluir 10 μL em 0,99 mL (total de 1 mL), ou seja, a afirmativa erra ao usar 9,99 mL em vez de 0,99 mL. Essa é a pegadinha central da questão.
A terceira afirmativa está correta: a diluição seriada log2 a partir de 64 μg/mL gera as concentrações 32, 16, 8, 4, 2 e 1 μg/mL nos tubos 2 a 7, respectivamente. Cada tubo tem metade da concentração do anterior, pois o fator de diluição é 1:2.
NÃO CAIA NESSA!
A banca troca o volume de diluente na segunda afirmativa: para diluir 10 μL de estoque (6,4 mg/mL) e obter 64 μg/mL, o volume final deve ser 1 mL (0,99 mL de diluente), não 10 mL (9,99 mL). O candidato que não faz o cálculo cai na armadilha e marca V.
Afirmativa 1 — ✅ Verdadeira
A afirmativa descreve corretamente o procedimento de diluição seriada: preparar 10 mL da solução de 64 μg/mL no tubo 1, retirar 5 mL e transferir para 5 mL de diluente no tubo 2, repetindo até o tubo 7, onde os 5 mL em excesso são descartados. Isso está de acordo com o protocolo de diluição 1:2, pois cada transferência de 5 mL para 5 mL de diluente reduz a concentração pela metade, e o descarte no último tubo é necessário para manter o volume final de 5 mL em cada tubo.
Afirmativa 2 — ❌ Falsa
A afirmativa está incorreta porque a diluição proposta não resulta em 64 μg/mL. Ao diluir 10 μL de uma solução estoque de 6,4 mg/mL em 9,99 mL de diluente, o volume final é 10 mL, e a concentração final é 6,4 μg/mL, não 64 μg/mL. Para obter 64 μg/mL, seria necessário diluir 10 μL em 0,99 mL (volume final de 1 mL). O erro está no volume de diluente: 9,99 mL em vez de 0,99 mL.
Afirmativa 3 — ✅ Verdadeira
A afirmativa está correta: as concentrações nos tubos 2 a 7 são 32, 16, 8, 4, 2 e 1 μg/mL, respectivamente. Isso decorre da diluição seriada log2, onde cada tubo tem metade da concentração do anterior, partindo de 64 μg/mL no tubo 1.
Conclusão: Corretas: afirmativas 1 e 3 → portanto a alternativa é a letra C (V – F – V).
