Questão de Biologia — Bioinformática — FUNDATEC 2024

Por meio da curva de dissociação são obtidos os valores da temperatura de melting (Tm), que refletem a temperatura onde 50% dos fragmentos amplificados estão dissociados e, dessa forma, geram uma queda na fluorescência detectada. Dessa forma, é possível detectar amplificações inespecíficas e formações de dímeros de primers. No caso de haver dois ou mais picos na curva de melting, é indicativo da amplificação de um subproduto inespecífico, indesejável na reação. Alguns procedimentos devem ser realizados para minimizar a presença de picos inespecíficos na curva de melting e garantir a especificidade da amplificação na sua reação de PCR. Com relação aos procedimentos realizados para minimizar a presença de picos inespecíficos na curva de melting, analise as assertivas abaixo e assinale a alternativa correta.

I. A análise de bioinformática é uma útil ferramenta para verificar se os primers desenhados não possuem homologia com outras sequências no genoma.

II. Deve-se manter a temperatura de anelamento elevada, de forma a evitar amplificação inespecífica.

III. Uma curva de gradiente de temperatura para determinar a temperatura de anelamento ideal pode auxiliar para avaliar a especificidade da amplificação.

IV. Realizar análises de homologia usando ferramentas bioinformáticas não é necessário para garantir que os iniciadores apresentem semelhanças com outras regiões do genoma.

V. Avaliação do tamanho do produto amplificado por meio de eletroforese em gel.