Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — FUNDATEC 2025

SDS-PAGE: princípios e aplicações

Gabarito: letra C — estão corretas apenas as assertivas II e III. A SDS-PAGE desnatura as proteínas com um detergente aniônico (SDS) e agentes redutores rompem as pontes dissulfeto, permitindo a separação dos polipeptídeos por massa molecular. A assertiva I é falsa porque a técnica não se restringe a proteínas solúveis em água, e a IV inverte a lógica do gel: o poro deve ser pequeno o suficiente para retardar a migração, não grande.

A eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) é uma das técnicas mais usadas em laboratório para separar proteínas. O SDS é um detergente aniônico que se liga às proteínas de forma proporcional à sua massa, conferindo-lhes carga negativa uniforme e desnaturando-as — ou seja, quebra a estrutura nativa, fazendo com que todas assumam uma conformação aproximadamente linear. Com isso, a separação passa a depender quase exclusivamente da massa molecular, e não da carga intrínseca ou da forma tridimensional. Para garantir que cada cadeia polipeptídica seja analisada isoladamente, adiciona-se um agente redutor, como o β-mercaptoetanol ou o DTT, que reduz as ligações dissulfeto (cisteínas) e impede que subunidades permaneçam unidas.

O gel de poliacrilamida forma uma malha cujo tamanho de poro é controlado pela concentração de acrilamida e do agente de reticulação. Quanto maior a concentração, menor o poro, e vice-versa. A função do poro é retardar a passagem das moléculas: proteínas maiores encontram mais resistência e migram mais devagar; as menores passam mais rápido. Portanto, o poro deve ser suficientemente pequeno para criar essa peneira molecular — se for grande demais, todas as proteínas migram juntas e não há separação. Essa é a pegadinha da assertiva IV.

A assertiva I também merece atenção: a SDS-PAGE é aplicável a proteínas de diferentes solubilidades, pois o SDS, ao desnaturar, solubiliza muitas proteínas que seriam insolúveis em água no estado nativo. Além disso, a técnica é usada para análise e caracterização, não como método de purificação em larga escala — a purificação geralmente envolve cromatografia ou outras abordagens.

Item I — ❌ Incorreto

Afirma que a SDS-PAGE serve apenas para purificar proteínas solúveis em água. Há dois erros: (1) a técnica não é um método de purificação, mas de separação/análise; (2) o SDS solubiliza e desnatura proteínas, permitindo analisar também proteínas de membrana e outras que não são naturalmente solúveis em água. Portanto, a restrição a "solúveis em água" é incorreta.

Item II — ✅ Correto

A estrutura nativa é desnaturada pelo SDS, um detergente aniônico. O SDS se liga à cadeia polipeptídica, rompendo interações não covalentes e conferindo carga negativa uniforme. Esse é o princípio central da técnica: eliminar as diferenças de carga e forma para que a separação reflita apenas a massa molecular.

Item III — ✅ Correto

Agentes redutores como o β-mercaptoetanol (ou ditiotreitol, DTT) reduzem as pontes dissulfeto entre cisteínas. Isso é essencial para que proteínas com múltiplas subunidades (ex.: anticorpos, hemoglobina) sejam dissociadas em seus polipeptídeos individuais, permitindo a análise de cada cadeia separadamente.

Item IV — ❌ Incorreto

A assertiva inverte a relação entre poro e migração. Para retardar a migração das proteínas de interesse, o poro deve ser pequeno o suficiente para oferecer resistência — não grande. Um poro grande deixaria as moléculas passarem livremente, sem separação. O ajuste da concentração de acrilamida permite criar géis com poros adequados à faixa de massa molecular que se deseja resolver.

Gabarito: letra C — corretas apenas as assertivas II e III.