Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — FUNDATEC 2025

RNA de interferência e o papel do scrambled siRNA

Gabarito: letra A. O scrambled siRNA é um controle negativo essencial em experimentos de RNAi porque permite distinguir os efeitos específicos do silenciamento gênico de respostas celulares inespecíficas causadas pela introdução de RNA exógeno. Essa é a função clássica de um controle negativo: expor as células ao mesmo estresse da transfecção, sem o silenciamento do gene-alvo.

O RNA de interferência (RNAi) é um mecanismo celular de silenciamento gênico pós-transcricional. Quando um siRNA (small interfering RNA) é introduzido na célula, ele é incorporado ao complexo RISC (RNA-induced silencing complex), que utiliza a sequência do siRNA como guia para clivar o mRNA complementar, impedindo a tradução da proteína. O problema experimental é que a própria transfecção — a introdução de RNA exógeno — pode disparar respostas celulares inespecíficas, como a ativação da resposta a interferon ou estresse celular, que podem mascarar ou confundir os resultados.

Para controlar esses efeitos, utiliza-se o scrambled siRNA: uma sequência de RNA com a mesma composição de nucleotídeos e o mesmo comprimento do siRNA específico, mas com sequência aleatória, sem complementaridade com qualquer mRNA endógeno. Assim, ele não silencia nenhum gene, mas reproduz os efeitos inespecíficos da transfecção. Ao comparar os resultados do siRNA específico com os do scrambled, o pesquisador pode atribuir as diferenças observadas especificamente ao silenciamento do gene-alvo, e não a artefatos do procedimento.

A alternativa correta captura exatamente essa função: o scrambled siRNA permite distinguir os efeitos específicos do silenciamento gênico de respostas celulares inespecíficas causadas pela introdução de RNA exógeno. As demais alternativas confundem o papel do scrambled com outros controles ou mecanismos.

Alternativa A — ✅ Correta ⟵ GABARITO

O scrambled siRNA é um controle negativo que reproduz os efeitos inespecíficos da transfecção (como ativação de resposta imune inata ou estresse celular), sem silenciar nenhum gene. Ao comparar os resultados do siRNA específico com os do scrambled, o pesquisador pode atribuir as diferenças observadas especificamente ao silenciamento do gene-alvo, e não a artefatos do procedimento. Essa é a função clássica de um controle negativo: expor as células ao mesmo estresse da transfecção, sem o silenciamento do gene-alvo.

Alternativa B — ❌ Incorreta

O scrambled siRNA não serve como controle positivo. O controle positivo em RNAi seria um siRNA que silencia um gene conhecido, como um gene constitutivo (ex.: GAPDH), para confirmar que o mecanismo de RNAi está funcionando na célula. O scrambled, por não ter alvo, não pode confirmar a eficiência da clivagem do mRNA — ele apenas controla efeitos inespecíficos.

Alternativa C — ❌ Incorreta

O scrambled siRNA não garante a incorporação preferencial do siRNA específico ao RISC. A incorporação ao complexo RISC depende da sequência e da estrutura do siRNA, não da presença de um scrambled. O scrambled é usado como controle, não como facilitador da incorporação.

Alternativa D — ❌ Incorreta

O scrambled siRNA não evita a degradação do mRNA endógeno por recombinação homóloga. A recombinação homóloga é um mecanismo de reparo do DNA, não relacionado à degradação de mRNA. A degradação do mRNA no RNAi ocorre por clivagem mediada pelo RISC, e o scrambled não interfere nesse processo.

Alternativa E — ❌ Incorreta

O scrambled siRNA não substitui a necessidade de genes constitutivos normalizadores nas análises por qPCR. Os genes constitutivos (como GAPDH, actina) são usados como controles endógenos para normalizar a expressão gênica entre amostras, independentemente do uso de RNAi. O scrambled é um controle experimental da transfecção, não um normalizador de qPCR.

Gabarito: letra A.