Questão de Biologia — Hereditariedade e diversidade da vida — FUNDATEC 2025

Sequenciamento de Sanger e detecção de heterozigose

Gabarito: letra D. Picos duplos bem definidos em uma posição do eletroferograma, sem ruído de fundo ou artefatos, indicam que o indivíduo possui dois alelos diferentes naquele locus — ou seja, é heterozigoto para uma mutação pontual. No sequenciamento de Sanger, cada pico corresponde a um nucleotídeo; quando há dois picos sobrepostos na mesma posição, isso revela a presença simultânea de duas bases diferentes, característica de um genótipo heterozigótico.

O sequenciamento de Sanger é uma técnica de terminação de cadeia: ddNTPs marcados com fluorescência interrompem a síntese em cada posição, gerando fragmentos de todos os tamanhos possíveis. No eletroferograma, cada pico representa um nucleotídeo incorporado. Em um indivíduo homozigoto, todos os fragmentos terminam com a mesma base naquela posição, gerando um pico único. Já em um heterozigoto, metade dos fragmentos termina com uma base e a outra metade com outra base, produzindo dois picos de alturas aproximadamente iguais na mesma posição — o chamado "pico duplo" ou "pico sobreposto".

A questão explora exatamente esse princípio: picos duplos bem definidos, sem ruído ou artefatos, são a assinatura clássica de uma mutação heterozigótica. As demais alternativas descrevem problemas técnicos que gerariam padrões diferentes no eletroferograma, como picos largos, sobrepostos ou com ruído de fundo.

Alternativa A — ❌ Incorreta

Falha na separação eletroforética resultaria em picos largos, mal resolvidos ou sobrepostos, com resolução ruim entre bandas adjacentes. O enunciado afirma que os picos são "bem definidos" e "sem ruído de fundo", o que descarta qualquer problema de separação.

Alternativa B — ❌ Incorreta

Contaminação cruzada entre amostras geraria uma mistura de sequências de dois indivíduos diferentes, resultando em múltiplos picos sobrepostos em várias posições, não apenas em uma posição específica. Além disso, a contaminação costuma produzir picos de alturas desiguais e padrões confusos, não "picos duplos bem definidos" em posições isoladas.

Alternativa C — ❌ Incorreta

Acúmulo de fragmentos truncados ocorre quando a reação de sequenciamento para prematuramente, gerando picos de alta intensidade no início do eletroferograma e perda de sinal nas regiões mais distantes. Isso não produz picos duplos em posições específicas.

Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Picos duplos bem definidos em uma posição, sem ruído ou artefatos, são a evidência direta de que o indivíduo possui dois alelos diferentes naquele locus — ou seja, é heterozigoto para uma mutação pontual. No sequenciamento de Sanger, cada alelo gera um pico; a presença de dois picos na mesma posição indica que metade dos fragmentos terminou com uma base e a outra metade com outra base, caracterizando a heterozigose.

Alternativa E — ❌ Incorreta

Excesso de ddNTP na amostra durante a reação causaria terminação prematura da síntese, resultando em fragmentos muito curtos e picos de baixa qualidade, com perda de sinal nas regiões mais distantes. Não produziria picos duplos bem definidos em posições específicas.

Gabarito: letra D