Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — FUNDATEC 2025

Eletroforese em gel: o papel do brometo de etídio

Gabarito: letra D. O brometo de etídio (EtBr) é um agente intercalante que se insere entre as bases nitrogenadas do DNA e, quando excitado por luz ultravioleta (UV), emite fluorescência — é exatamente isso que permite visualizar as bandas de DNA no gel de agarose após a eletroforese. As demais alternativas atribuem ao EtBr funções que não lhe pertencem (agente redutor, modificador de carga, formador de complexos covalentes ou tampão), todas incorretas.

A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas (DNA, RNA ou proteínas) com base no tamanho e na carga. O DNA, por ser um ácido nucleico, possui carga negativa devido aos grupos fosfato de sua espinha dorsal — por isso migra em direção ao polo positivo (ânodo) quando submetido a um campo elétrico. A separação ocorre porque moléculas menores atravessam os poros do gel mais rapidamente que as maiores. No entanto, o DNA não é naturalmente visível a olho nu; é aí que entra o brometo de etídio.

O EtBr é um corante fluorescente que se intercala entre as bases nitrogenadas da dupla hélice do DNA. Quando o gel é exposto à luz ultravioleta, o EtBr absorve essa energia e a reemite na forma de luz visível (fluorescência laranja/vermelha), revelando as bandas de DNA. Essa é a função central do reagente: permitir a visualização do DNA após a separação eletroforética. É importante destacar que o EtBr não participa da separação em si — ele não altera a carga do DNA, não age como tampão e não forma ligações covalentes com a molécula. Sua ação é puramente de detecção, e por isso é adicionado ao gel (ou à amostra) antes da corrida ou na etapa de coloração posterior.

A banca explora aqui um erro conceitual comum: confundir a função do corante com a função de outros componentes da eletroforese. O tampão (como TBE ou TAE) é quem mantém o pH estável e conduz a corrente elétrica; a carga negativa do DNA é intrínseca à molécula, não é conferida por nenhum reagente; e a separação por tamanho é determinada pela malha do gel, não pelo EtBr. Saber distinguir o papel de cada elemento é o que resolve a questão.

Alternativa A — ❌ Incorreta

O brometo de etídio não é um agente redutor e não previne a oxidação do DNA. A oxidação do DNA durante a eletroforese não é um problema relevante nesse contexto, e o EtBr não possui propriedades redutoras. Sua função é exclusivamente de visualização por intercalação e fluorescência.

Alternativa B — ❌ Incorreta

O EtBr não modifica a carga negativa do DNA. A carga negativa é uma propriedade intrínseca da molécula, conferida pelos grupos fosfato do esqueleto açúcar-fosfato. A separação por tamanho ocorre porque o gel atua como uma peneira molecular — moléculas menores migram mais rápido —, e não porque o corante altera a carga.

Alternativa C — ❌ Incorreta

O EtBr não reage com as extremidades fosfato do DNA formando complexos covalentes. A interação do EtBr com o DNA é por intercalação entre as bases nitrogenadas, um processo não covalente e reversível. Não há formação de ligação covalente estável entre o corante e o ácido nucleico.

Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Esta é a descrição precisa da função do brometo de etídio: ele se intercala entre as bases nitrogenadas da dupla hélice e, quando excitado por luz ultravioleta, emite fluorescência, permitindo a visualização das bandas de DNA no gel. É exatamente o mecanismo descrito no enunciado — a pesquisadora adicionou EtBr ao gel para garantir a visualização das bandas.

Alternativa E — ❌ Incorreta

O EtBr não funciona como tampão. A estabilização do pH do meio eletroforético é função do tampão de corrida (como TBE ou TAE), que também conduz a corrente elétrica. O brometo de etídio é um corante fluorescente, sem qualquer propriedade tamponante.

Gabarito: letra D