Biologia · FUNDATEC · 2025 | Questão sqc-qg483969

Razão A260/A280 na espectrofotometria de ácidos nucleicos

Gabarito: letra B. A razão entre as absorbâncias a 260 nm e 280 nm (A260/A280) é o parâmetro clássico de pureza de ácidos nucleicos: valores em torno de 1,8 indicam DNA puro, enquanto valores próximos de 2,0 indicam RNA puro. A alternativa B reproduz exatamente esse critério para o DNA.

A espectrofotometria é uma técnica que mede a quantidade de luz absorvida por uma amostra em determinado comprimento de onda. Os ácidos nucleicos (DNA e RNA) absorvem fortemente luz ultravioleta no comprimento de onda de 260 nm, devido às bases nitrogenadas (adenina, guanina, citosina, timina e uracila) presentes em sua estrutura. Já as proteínas, por conterem aminoácidos aromáticos (como triptofano e tirosina), absorvem luz no comprimento de onda de 280 nm.

A razão A260/A280 é, portanto, um indicador de contaminação por proteínas: quanto maior a contaminação proteica, maior a absorbância a 280 nm e, consequentemente, menor a razão. Um DNA puro apresenta razão em torno de 1,8; um RNA puro, em torno de 2,0. Valores significativamente abaixo desses referenciais indicam contaminação por proteínas ou por outros contaminantes que absorvem a 280 nm, enquanto valores acima de 2,0 podem sugerir contaminação por fenol, um reagente comumente usado na extração de ácidos nucleicos.

A banca explora justamente a confusão entre os comprimentos de onda de absorção (260 nm para ácidos nucleicos e 280 nm para proteínas) e os valores de referência da razão para DNA e RNA. É uma questão de memorização de valores e conceitos fundamentais de biologia molecular.

Critério	DNA puro	RNA puro
Absorção máxima	260 nm	260 nm
Razão A260/A280	≈ 1,8	≈ 2,0
Contaminação por proteínas	Razão < 1,8	Razão < 2,0
Contaminação por fenol	Razão > 2,0	Razão > 2,0

Alternativa A — ❌ Incorreta

Afirma que valores próximos de 1,0 indicam DNA de alta qualidade. Esse valor está muito abaixo do esperado para DNA puro (≈1,8). Uma razão de 1,0 indica contaminação significativa, geralmente por proteínas, e não alta qualidade.

Alternativa B — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Valores em torno de 1,8 são, de fato, típicos de DNA puro. Esse é o valor de referência consagrado na literatura e na prática laboratorial para avaliar a pureza de preparações de DNA.

Alternativa C — ❌ Incorreta

Afirma que ácidos nucleicos absorvem luz no comprimento de onda de 280 nm. Na verdade, os ácidos nucleicos absorvem luz no comprimento de onda de 260 nm. A absorção a 280 nm é característica de proteínas, devido aos aminoácidos aromáticos. A alternativa inverte os comprimentos de onda de absorção.

Alternativa D — ❌ Incorreta

Afirma que valores entre 1,2 e 1,4 são indicativos de RNA altamente íntegro. O valor de referência para RNA puro é em torno de 2,0. Valores entre 1,2 e 1,4 indicam contaminação significativa, não integridade.

Alternativa E — ❌ Incorreta

Afirma que valores superiores a 2,0 indicam ausência de contaminantes fenólicos. Na verdade, valores acima de 2,0 podem indicar a presença de fenol, um contaminante comum em extrações de ácidos nucleicos, que absorve em comprimentos de onda próximos a 270 nm e pode elevar a razão A260/A280. Portanto, valores superiores a 2,0 não indicam ausência de fenol, mas possível contaminação por ele.

NÃO CAIA NESSA!

A banca troca os comprimentos de onda de absorção (260 nm para ácidos nucleicos, 280 nm para proteínas) e os valores de referência da razão (1,8 para DNA, 2,0 para RNA). Na alternativa C, ela inverte os comprimentos de onda; na E, ela inverte o significado de valores altos da razão, que podem indicar contaminação por fenol, não ausência dela. Fique atento a essas inversões clássicas.

PEGA ESSA DICA!

Para memorizar, lembre-se: "260 nm = ácidos nucleicos" e "280 nm = proteínas". A razão A260/A280 para DNA puro é 1,8; para RNA puro, 2,0. Valores abaixo indicam contaminação por proteínas; valores acima de 2,0 podem indicar contaminação por fenol. Monte uma tabela mental com esses valores e revise antes da prova.

Gabarito: letra B.