Questão de Técnicas em Laboratório — Hematologia nas Técnicas em Laboratório — FUNIVERSA 2012
Técnicas em LaboratórioHematologia nas Técnicas em Laboratório
- Código
- qg878492
- Banca
- FUNIVERSA
- Órgão
- PC-DF
- Ano
- 2012
- Nível
- Superior
- Cargo
- Perito Criminal - Biológicas
Um grupo japonês publicou um novo protocolo para a genotipagem de grupo sanguíneo ABO, utilizando iniciadores aleloespecíficos e PCR em tempo real. Pela avaliação de três SNPs situados no gene do ABO, é possível a determinação dos seis principais genótipos do sistema ABO. A ideia do novo protocolo é trabalhar com amostras forenses e fornecer resultados rápidos, visto que o novo método demanda menos de 2 horas e utiliza 2,0 ng de DNA.T. Muro et al. Determination of ABO genotypes by real-time PCR using allele-specific primers. Tokyo: 2011 (com adaptações).Considerando as informações do texto, a genotipagem do sistema ABO descrita pelo grupo japonês baseia-se em
- Adigerir o DNA com enzimas de restrição específicas para os três SNPs, gerando extremidades colantes que serão aderidas aos iniciadores específicos; posteriormente, esse conjunto será submetido à amplificação por PCR em tempo real, e a genotipagem será avaliada após sequenciamento automático.
- Bgerar pequenos fragmentos genômicos a partir da amplificação por PCR em tempo real com três iniciadores aleloespecíficos, digerir com enzimas de restrição especificas e fazer a genotipagem pelo perfil observado em gel após eletroforese.
- Cutilizar a PCR em tempo real para amplificar cada SNP com os iniciadores aleloespecíficos, sequenciar os produtos em sequenciadores de segunda geração e, a partir do alinhamento das sequências, definir os genótipos.
- Damplificar a região genômica em questão, utilizando PCR em tempo real, com os três pares de iniciadores aleloespecíficos marcados com fluorescência, simultaneamente, e sequenciar o produto desse multiplex para obtenção dos haplótipos que irão possibilitar a definição dos genótipos.
- Eanalisar cada SNP individualmente via PCR em tempo real, utilizando iniciadores aleloespecíficos marcados com fluorescência e, de acordo com a avaliação dos sinais de fluorescência, definir o(s) alelo(s) para cada sítio genômico e, com esses dados, definir os genótipos.