Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — INSTITUTO AOCP 2018
Biologia›Moléculas, células e tecidos
Código
qq373682
Banca
INSTITUTO AOCP
Órgão
ITEP-RN
Ano
2018
Nível
Superior
Cargo
ITEP - RN - Perito Criminal - Ciências Biológicas
Considerando as técnicas de sequenciamento do DNA, a respeito das características desse tipo de procedimento, assinale a alternativa correta.
AO método de dideoxinucleotídeos utiliza o grupo 3-hidroxila.
BO método Sanger também é conhecido como sequenciamento de nova geração.
CA presença de ddNTPs na reação dispensa a adição de desoxinucleotídeos trifosfato normais.
DOs fragmentos resultantes são separados eletroforeticamente e submetidos à autorradiografia.
EA utilização de vetores plasmidiais, em técnicas de subclonagem de fragmentos de DNA, é denominada “pirossequenciamento”.
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GabaritoD — Os fragmentos resultantes são separados eletroforeticamente e submetidos à autorradiografia.
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Técnicas de sequenciamento de DNA
Gabarito: letra D. No método Sanger (dideoxinucleotídeos), os fragmentos gerados são separados por eletroforese e detectados por autorradiografia (ou fluorescência). As demais alternativas contêm erros conceituais: o método usa ddNTPs que não possuem grupo 3-hidroxila (alternativa A); Sanger não é sequenciamento de nova geração (alternativa B); a reação exige dNTPs normais além dos ddNTPs (alternativa C); e subclonagem em vetores plasmidiais não é pirossequenciamento (alternativa E).
1Adiciona dNTPs + ddNTPs
2Polimerase estende a cadeia
3ddNTP (sem 3'-OH) termina
4Fragmentos de vários tamanhos
5Eletroforese separa fragmentos
6Detecção (autorradiografia/fluorescência)
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Alternativa A — ❌ Incorreta
O método de dideoxinucleotídeos (Sanger) utiliza ddNTPs que carecem do grupo 3-hidroxila, o que impede a formação da ligação fosfodiéster e termina a cadeia. A alternativa afirma o contrário, dizendo que utiliza o grupo 3-hidroxila, o que é um erro conceitual.
Alternativa B — ❌ Incorreta
O método Sanger é o sequenciamento clássico, por capilar ou gel, e não é classificado como sequenciamento de nova geração (NGS). NGS refere-se a tecnologias de alto rendimento como Illumina, 454, Ion Torrent, etc.
Alternativa C — ❌ Incorreta
Na reação de Sanger, são adicionados tanto dNTPs (normais) quanto ddNTPs (terminadores). Os ddNTPs estão em baixa concentração para causar terminações aleatórias; sem os dNTPs normais, a polimerase não conseguiria estender a cadeia até o ponto de terminação. Portanto, a presença de ddNTPs não dispensa os dNTPs.
Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO
Os fragmentos de DNA de diferentes tamanhos gerados pela terminação com ddNTPs são separados por eletroforese em gel (ou capilar) e detectados por autorradiografia (antigamente) ou fluorescência (atualmente). Essa é a descrição correta do método Sanger.
Alternativa E — ❌ Incorreta
A subclonagem de fragmentos de DNA em vetores plasmidiais é uma técnica de clonagem molecular, mas não é denominada pirossequenciamento. Pirossequenciamento é um método de sequenciamento que detecta a liberação de pirofosfato durante a incorporação de nucleotídeos, sendo diferente do Sanger.