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Questão de Farmácia — Análises Clínicas — NUCEPE 2018

FarmáciaAnálises Clínicas
Código
qq384440
Banca
NUCEPE
Órgão
PC-PI
Ano
2018
Nível
Superior
Cargo
Perito Criminal – Farmácia
A técnica de western blotting (Towbin et al. 1979; Burnette 1981; Towbin and Gordon 1984) também pode ser denominada protei n immunoblot e consiste na detecção de proteínas específicas em amostras de lisados celulares ou amostras de tecidos. Com base nessa técnica, julgue as afirmativas e marque a alternativa CORRETA.I- Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências dessas proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados.II- Diversos métodos espectroscópicos são utilizados para quantificar proteínas em uma solução. O ensaio de Bradford é o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como a rapidez, a não exigência de aquecimento e a alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. O método de Bradford se baseia na mudança de cor do corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida (cor azulada) para cor avermelhada na presença de proteínas. As interações hidrofóbicas e iônicas estabilizam o complexo proteína-corante.III- Para separar as proteínas de uma amostra homogênea, a técnica mais utilizada é a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-poliacrilamida, que será uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel é preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. As proteínas podem possuir cargas positivas ou negativas, dependendo das cargas dos aminoácidos que as compõem.IV- Para visualizar uma proteína de interesse, é utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epítopo da proteína, formando um complexo anticorpoantígeno. Esse anticorpo é denominado anticorpo primário, que pode ser policlonal (reconhece mais de um epítopo) ou monoclonal (reconhece apenas um epítopo da proteína de interesse) e é geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho.
  1. AApenas II e IV são incorretas.
  2. BTodas são incorretas.
  3. CApenas IV é incorreta.
  4. DApenas I e II são corretas.
  5. ETodas são corretas.
Revelar gabarito e comentário

GabaritoA — Apenas II e IV são incorretas.

Comentário gerado por IA. É um apoio ao estudo, ancorado em fontes, mas pode conter imprecisões — confira sempre na fonte oficial (lei, súmula, edital e gabarito da banca). Encontrou um erro? Use “Reportar”.

Western blotting e técnicas relacionadas

Gabarito: letra A — as afirmativas I e III estão corretas; II e IV estão incorretas. A alternativa A ("Apenas II e IV são incorretas") é a resposta correta.

  1. 1Extração e quantificação de proteínas
  2. 2Fracionamento por SDS-PAGE
  3. 3Transferência para membrana
  4. 4Incubação com anticorpo específico
  5. 5Revelação e análise dos dados
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Afirmativa I — ✅ Correta

Descreve adequadamente as cinco etapas clássicas do Western blot: extração/quantificação de proteínas, fracionamento por SDS-PAGE, transferência para membrana, incubação com anticorpo específico e revelação. Sequência padronizada desde os trabalhos originais (Towbin et al., 1979).

Afirmativa II — ❌ Incorreta

O erro está na descrição da mudança de cor do ensaio de Bradford. O corante Coomassie Blue G-250, em solução ácida, apresenta coloração avermelhada/ acastanhada, não azulada. Na presença de proteínas, o corante torna-se azul. A afirmativa inverte essa ordem, o que a torna falsa. As interações hidrofóbicas e iônicas estão corretamente mencionadas, mas o erro na cor compromete a assertiva.

Afirmativa III — ✅ Correta

Explica corretamente a preparação do gel de SDS-PAGE, o ajuste da porosidade pela concentração de acrilamida e a característica das proteínas de possuírem cargas positivas ou negativas conforme seus aminoácidos. Embora no SDS-PAGE as proteínas adquiram carga negativa pelo SDS, a afirmação geral sobre as cargas intrínsecas é verdadeira.

Afirmativa IV — ❌ Incorreta

A afirmativa diz que o anticorpo primário é "geralmente obtido apenas em camundongo ou em coelho". Na realidade, anticorpos primários podem ser produzidos em diversas espécies (camundongo, coelho, cabra, ovelha, etc.). O uso de "apenas" torna a assertiva falsa. A parte sobre anticorpos policlonais (reconhecem múltiplos epítopos) e monoclonais (reconhecem um único epítopo) está correta.

Conclusão: Afirmativas corretas: I e III. Afirmativas incorretas: II e IV. Portanto, a alternativa que afirma "Apenas II e IV são incorretas" é a letra A.

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