Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e a função dos iniciadores
Gabarito: letra E. Na PCR, os iniciadores (primers) são oligonucleotídeos que se anelam às extremidades da sequência alvo, definindo os limites do fragmento a ser amplificado. A DNA polimerase só consegue iniciar a síntese a partir de uma região de dupla fita, e os primers fornecem esse ponto de partida, tornando indispensáveis para identificar a região de interesse.
O texto de apoio descreve o princípio:
Reação em cadeia da polimerase (Wikipédia):
"dois iniciadores de DNA que são complementares das extremidades 3 '... a polimerase de DNA só pode se ligar e alongar-se a partir de uma região de DNA de cadeia dupla, sem primers lá não é um local de iniciação de cadeia dupla no qual a polimerase pode se ligar; iniciadores específicos que são complementares da região alvo do DNA são selecionados de antemão"
Isso demonstra que os primers determinam os limites da amplificação.
Alternativa A — ❌ Incorreta
Afirma que os iniciadores garantem a estabilidade do fragmento de DNA durante as variações de temperatura. Na verdade, a estabilidade é conferida pela polimerase termoestável (Taq) e pelo tampão da reação. Os primers atuam na especificidade e no início da síntese, não na proteção contra desnaturação.
Alternativa B — ❌ Incorreta
Diz que os iniciadores aumentam a estringência da Taq polimerase. A estringência (especificidade do anelamento) depende da temperatura e da composição do tampão (concentração de Mg²⁺, por exemplo), não diretamente dos primers. Embora a temperatura de anelamento seja calculada com base na Tm dos primers, eles não "aumentam a estringência" da enzima.
Alternativa C — ❌ Incorreta
Afirma que os iniciadores se ligam ao MgCl₂, que seria responsável pela extensão da cadeia. O Mg²⁺ é um cofator essencial para a atividade da polimerase, mas não se liga aos primers; estes se ligam ao DNA molde. O Mg²⁺ forma complexos com os dNTPs e com a enzima, não com os primers diretamente.
Alternativa D — ❌ Incorreta
Afirma que os iniciadores proporcionam o alongamento da cadeia peptídica no sentido 3'→5'. A PCR amplifica DNA, não peptídeos. Além disso, a síntese de DNA pela Taq polimerase ocorre no sentido 5'→3'. A direção 3'→5' seria de exonuclease, não de polimerização.
Alternativa E — ✅ Correta ⟵ GABARITO
Os iniciadores são projetados para serem complementares às extremidades 3' da sequência alvo, delimitando a região que será copiada. Sem eles, a polimerase não teria um ponto de partida, e a amplificação não seria específica. Portanto, sua função é exatamente "identificar os limites da sequência de DNA a ser estudada".
Gabarito: letra E