Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — IDECAN 2023
Biologia›Moléculas, células e tecidos
Código
qq945368
Banca
IDECAN
Órgão
SSP-SE
Ano
2023
Nível
Superior
Cargo
Perito Criminalístico - Área 05: Farmácia, Bioquímica, Biomedicina ou Biologia
Sobre as técnicas de sequenciamento de DNA, é correto afirmar que
Aa plataforma Illumina (Solexa) utiliza piro-sequenciamento, a qual se baseia na utilização da enzima luciferase.
Bnas técnicas de sequenciamento de segunda geração não há utilização de eletroforese ou clonagem de DNA.
Cuma das características dos sequenciamentos de primeira geração é o uso de fluoróforos ligados aos dNTPs.
Dtécnicas de terceira geração são menos propensas a erros e dispensa qualquer tipo de análise e validação posterior.
Esequenciamento de terceira geração também é chamado de sequenciamento de nova geração (next generation sequencing).
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GabaritoB — nas técnicas de sequenciamento de segunda geração não há utilização de eletroforese ou clonagem de DNA.
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Técnicas de sequenciamento de DNA
Gabarito: letra B. Nas técnicas de segunda geração (Illumina, 454, Ion Torrent) não há necessidade de eletroforese ou clonagem, pois a amplificação é feita por PCR e a detecção ocorre por sinais ópticos ou elétricos durante a síntese, sem separação por tamanho. As demais alternativas contêm erros conceituais ou terminológicos.
A banca testa o conhecimento das características de cada geração de sequenciamento. É importante diferenciar os métodos quanto ao princípio, reagentes e necessidade de etapas como clonagem e eletroforese.
Sequenciamento de DNA: 1ª geração (Sanger) (Eletroforese, Clonagem em vetores, ddNTPs marcados (fluoróforos)); 2ª geração (NGS) (Sem eletroforese, Sem clonagem, Amplificação por PCR, Detecção óptica/elétrica); 3ª geração (Alta acurácia, Exige análise bioinformática)
Alternativa A — ❌ Incorreta
A plataforma Illumina (Solexa) não utiliza pirosequenciamento. O pirosequenciamento é característico do método 454 Roche, que detecta a liberação de pirofosfato pela enzima luciferase. A Illumina emprega sequenciamento por síntese com terminadores reversíveis marcados com fluoróforos.
Alternativa B — ✅ Correta ⟵ GABARITO
Os sequenciamentos de segunda geração (NGS) amplificam o DNA por PCR em emulsão ou em ponte, eliminando a etapa de clonagem em vetores. A detecção dos nucleotídeos incorporados é feita por fluorescência (Illumina, 454) ou por variação de pH (Ion Torrent), sem necessidade de eletroforese capilar ou em gel. Assim, a afirmativa está correta.
Alternativa C — ❌ Incorreta
A característica marcante dos sequenciamentos de primeira geração (método Sanger automatizado) é o uso de ddNTPs (didesoxinucleotídeos) marcados com fluoróforos, e não de dNTPs. Os ddNTPs atuam como terminadores de cadeia. Além disso, o Sanger manual utilizava marcadores radioativos, não fluoróforos. A alternativa troca o tipo de nucleotídeo (dNTP por ddNTP), o que invalida a afirmação.
Alternativa D — ❌ Incorreta
Técnicas de terceira geração (PacBio, Nanopore) têm alta acurácia, mas não dispensam análise e validação posteriores. Todo sequenciamento requer processamento bioinformático, alinhamento e controle de qualidade. A afirmativa é exagerada e incorreta.
Alternativa E — ❌ Incorreta
O termo "sequenciamento de nova geração" (next-generation sequencing, NGS) é usado para os métodos de segunda geração, não para os de terceira. A terceira geração é frequentemente chamada de "sequenciamento de molécula única" (single-molecule sequencing).
NÃO CAIA NESSA!
Na alternativa C, a banca troca "ddNTP" por "dNTP", uma confusão comum. No Sanger, a fluorescência está nos didesoxinucleotídeos terminadores, não nos nucleotídeos comuns. Fique atento a essa diferença terminológica.
Resumo das gerações
Geração
Características
Exemplos
1ª
Clonagem, eletroforese, ddNTPs marcados
Sanger manual e automatizado
2ª
PCR, detecção por fluorescência/pH, sem eletroforese