Questão de Veterinária — Doenças Infecciosas — VUNESP 2023

Detecção molecular do vírus da raiva: RT-PCR

Gabarito: letra D. A técnica descrita é a RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction), pois o enunciado menciona que o RNA é isolado e convertido em cDNA para ser amplificado — exatamente o princípio da transcrição reversa seguida de PCR. A fonte é o conhecimento consolidado de biologia molecular aplicada ao diagnóstico de raiva.

A raiva é uma zoonose viral causada por um RNA vírus da família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus. O diagnóstico laboratorial clássico baseia-se na imunofluorescência direta (IFD) e no isolamento viral em camundongos ou cultivo celular. Contudo, nos últimos anos, a biologia molecular ganhou espaço por sua alta sensibilidade, especificidade e rapidez, especialmente em amostras autolisadas ou em material de animais suspeitos.

A técnica molecular descrita na questão é a RT-PCR. O nome já entrega o mecanismo: a sigla RT vem de reverse transcription (transcrição reversa), etapa em que a enzima transcriptase reversa converte o RNA viral em DNA complementar (cDNA). Em seguida, a PCR convencional amplifica esse cDNA, permitindo a detecção de quantidades mínimas do material genético do vírus. Essa é a razão pela qual a RT-PCR é a ferramenta de escolha para vírus de RNA, como o da raiva, da influenza e do HIV.

A confusão mais comum é entre PCR e RT-PCR. A PCR convencional amplifica DNA diretamente; se o alvo é RNA, é obrigatório o passo de transcrição reversa antes da amplificação. Por isso, quando o enunciado fala em "RNA isolado e convertido em cDNA", a resposta só pode ser RT-PCR. As demais alternativas — Western-blot, CRISPR/Cas9 e sequenciamento genético — são técnicas legítimas, mas não se encaixam na descrição apresentada.

Guarde a sequência lógica: RNA → cDNA (transcrição reversa) → amplificação (PCR) = RT-PCR. É exatamente esse fluxo que a questão descreve e que separa a alternativa correta das demais.

Alternativa A — ❌ Incorreta

A PCR (Polymerase Chain Reaction) amplifica DNA, não RNA diretamente. Como o vírus da raiva tem genoma de RNA, a PCR convencional não é aplicável sem a etapa prévia de transcrição reversa. A banca usa essa alternativa para testar se o candidato conhece a diferença entre PCR e RT-PCR.

Alternativa B — ❌ Incorreta

O Western-blot é uma técnica imunológica que detecta proteínas específicas por meio de anticorpos, após separação por eletroforese em gel. Não avalia material genético (RNA/DNA), portanto não se aplica à descrição do enunciado.

Alternativa C — ❌ Incorreta

CRISPR/Cas9 é uma ferramenta de edição genética, utilizada para modificar o genoma de organismos. Não é um método de detecção de material genético viral, e não envolve transcrição reversa nem amplificação por PCR.

Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO

A RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) é exatamente a técnica que isola o RNA, converte em cDNA pela transcriptase reversa e amplifica por PCR. É amplamente utilizada no diagnóstico molecular da raiva e de outros vírus de RNA, por sua alta sensibilidade e especificidade.

Alternativa E — ❌ Incorreta

O sequenciamento genético determina a ordem dos nucleotídeos de um fragmento de DNA ou RNA. Embora possa ser usado para caracterizar o vírus, não é o método descrito, que envolve conversão em cDNA e amplificação — características da RT-PCR.

Gabarito: letra D