Questão de Técnicas em Laboratório — Técnicas Bioquímicas Indicadas no Diagnóstico de Diversas Patologias Humanas — VUNESP 2024
Técnicas em LaboratórioTécnicas Bioquímicas Indicadas no Diagnóstico de Diversas Patologias Humanas
- Código
- vu089133
- Banca
- VUNESP
- Órgão
- UNICAMP
- Ano
- 2024
- Nível
- Superior
- Cargo
- Profissional de Pesquisa, Engenharia e Tecnologia
Uma equipe de pesquisadores está utilizando a técnica de sequenciamento de Sanger para determinar a sequência de nucleotídeos de um gene de interesse. Durante o processo, eles notam que os cromatogramas gerados apresentam picos de sinal muito próximos uns dos outros, resultando em dificuldades para diferenciar as bases corretamente. Além disso, os picos das bases G e A estão consistentemente mais fracos em comparação com T e C.Em relação às etapas e aos possíveis problemas na técnica de sequenciamento de Sanger, assinale a alternativa que oferece a melhor abordagem para resolver o problema observado.
- ARevisar a quantidade de DNA molde e o ciclo de PCR utilizado, aumentando a quantidade de DNA molde e otimizando o ciclo de PCR, para melhorar a qualidade e a intensidade dos picos das bases G e A.
- BAumentar a concentração de MgCl₂ na reação de sequenciamento, para estabilizar a polimerase e melhorar a intensidade dos picos das bases G e A.
- CUtilizar um primer mais curto para aumentar a especificidade da ligação, e obter picos mais bem definidos no cromatograma.
- DAjustar o ciclo de desnaturação na PCR de sequenciamento para uma temperatura mais baixa, para evitar a degradação do DNA molde e melhorar a qualidade dos picos.
- EReduzir a concentração dos ddNTPs (dideoxinucleotídeos) na reação de sequenciamento, para diminuir a frequência de terminação e obter picos mais espaçados.