Questão de Farmácia — Análises Clínicas — VUNESP 2025
FarmáciaAnálises Clínicas
- Código
- vu091481
- Banca
- VUNESP
- Órgão
- Butantan - SP
- Ano
- 2025
- Nível
- Superior
- Cargo
- Pesquisador Científico I - Área de Especialização: Anticorpos Monoclomais para Uso Médico
Para a maioria das descobertas de anticorpos, esforços significativos foram despendidos na clonagem de células para identificar células B isoladas pareadas às sequências de anticorpos que elas produzem. Essas sequências são importantes, pois foram selecionadas pelo sistema imunológico como ligantes biologicamente relevantes, proporcionando proteção contra patógenos durante a infecção. No entanto, as sequências de cadeia pesada (VH) e leve (VL) vêm de diferentes transcritos de mRNA, e, se culturas mistas de células B forem lisadas para capturar as sequências que codificam os anticorpos, o pareamento original do anticorpo é perdido e ele não se ligará mais ao alvo pretendido.Resumidamente, segundo Keating e Higgins (2024), como as novas técnicas de produção de anticorpos terapêuticos recombinantes superaram esse problema?
- APor meio da amplificação das regiões VH e VL por PCR de um lisado total de DNA genômico ou cDNA originados de células B isoladas, sendo os amplicons gerados clonados diretamente em vetor plasmidial para posterior expressão.
- BUtilizando mRNA total extraído do sangue de pacientes vacinados ou convalescentes, é possível gerar cDNA a partir desse material para posterior amplificação das regiões VH e VL por PCR para geração de bibliotecas de fragmentos variáveis de cadeia única (scFv) e posterior expressão em fagos.
- CUsando citometria de fluxo ou encapsulamento de gotículas, células B são isoladas individualmente sendo coencapsuladas com tampão de lise e esferas de poli (dT) magnéticas para posterior amplificação das regiões VH e VL e geração de fragmentos variáveis de cadeia única (scFv) pareados nativamente.
- DO isolamento é realizado em placas de 96 poços, onde as células B são cultivadas em grupos, seguido de amplificação por PCR específica da região Fc e clonagem em vetor para sequenciamento.
- EPor meio do uso de ferramentas de predição de epítopos por bioinformática, associada a métodos de isolamento em placa e imunoensaios utilizando peptídeos ligados a membranas.