Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — VUNESP 2025

Microscopia de luz: contraste de fase

Gabarito: letra C. A descrição fornecida — uso de dois conjuntos de raios luminosos (direto e derivado de reflexão/refração/difração) que se recombinam para formar imagem com variação de tons de cinza, sem necessidade de fixação ou coloração — corresponde exatamente à microscopia de contraste de fase. Essa técnica converte diferenças de fase da luz, causadas por estruturas celulares com diferentes índices de refração, em diferenças de amplitude (contraste), permitindo visualizar detalhes internos de células vivas e não coradas.

A banca testa o conhecimento das características específicas de cada tipo de microscopia de luz. A chave está em identificar que o enunciado menciona dois conjuntos de raios luminosos (um direto, outro desviado pela amostra) que se encontram para formar a imagem. Isso é típico do contraste de fase, enquanto outros métodos utilizam princípios diferentes.

Alternativa A — ❌ Incorreta

A microscopia de campo claro ilumina a amostra por baixo e forma imagem com fundo claro e estruturas escuras (se coradas). Não permite observar estruturas internas sem coloração, pois o contraste é baixo. A descrição do enunciado fala em dois conjuntos de raios, o que não ocorre no campo claro (apenas luz transmitida direta).

Alternativa B — ❌ Incorreta

A microscopia de campo escuro utiliza um condensador especial que desvia a luz direta, de modo que apenas a luz difratada pela amostra atinge a objetiva. A imagem tem fundo escuro e bordas brilhantes. Embora dispense coloração, não permite visualizar estruturas internas com detalhes – apenas contornos e partículas. O enunciado menciona dois conjuntos de raios que se encontram, o que é diferente do princípio do campo escuro (apenas luz difratada).

Alternativa C — ✅ Correta ⟵ GABARITO

A microscopia de contraste de fase (desenvolvida por Zernike) utiliza um anel de fase na objetiva que separa a luz não desviada (direta) da luz desviada (difratada/refratada pela amostra). Ao se recombinarem, as diferenças de fase são convertidas em diferenças de intensidade (contraste), gerando tons de cinza. Permite observar estruturas internas de células vivas sem fixar ou corar, exatamente como descrito.

Alternativa D — ❌ Incorreta

A microscopia de fluorescência utiliza corantes fluorescentes que emitem luz de comprimento de onda maior quando excitados por uma fonte de luz (geralmente ultravioleta ou laser). Exige marcação da amostra com fluoróforos, o que contraria a afirmação de que não é necessário corar. Além disso, o princípio descrito (dois conjuntos de raios) não se aplica diretamente.

Alternativa E — ❌ Incorreta

A microscopia confocal é uma variação da fluorescência que usa laser e um orifício (pinhole) para eliminar luz fora de foco, aumentando a resolução. Também requer corantes fluorescentes e não se adequa à descrição de dispensar coloração. O sistema de dois conjuntos de raios mencionado não corresponde ao funcionamento confocal.

Resumo comparativo das microscopias de luz

Gabarito: letra C.