Questão de Biologia — Imunoensaios — VUNESP 2024

Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para pesquisa de antígenos

Gabarito: letra D. A questão pede apenas ensaios ELISA utilizados para a pesquisa de antígenos — ou seja, o analito detectado é o antígeno, não o anticorpo. Os ensaios competitivos (com antígeno ou anticorpo marcado) e a captura de antígeno são as modalidades empregadas para essa finalidade, enquanto o ELISA indireto e a captura de IgG classe específica são utilizados para a pesquisa de anticorpos. A alternativa D é a única que reúne exclusivamente ensaios de detecção de antígenos.

O ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) é uma técnica imunoenzimática que utiliza anticorpos ou antígenos ligados a uma enzima para detectar a presença de uma substância específica em uma amostra. A classificação dos ensaios ELISA depende do que se deseja pesquisar: se o alvo é o antígeno (proteína viral, bacteriana, hormônio, etc.) ou o anticorpo (IgG, IgM, IgA) produzido pelo paciente contra um agente infeccioso. Essa distinção é fundamental para entender a questão.

Quando o objetivo é pesquisar antígenos, as modalidades mais comuns são:

• ELISA sanduíche: um anticorpo de captura é fixado na placa, a amostra contendo o antígeno é adicionada e, em seguida, um anticorpo de detecção conjugado a enzima se liga ao antígeno. É amplamente utilizado para detectar antígenos virais (como HBsAg, antígeno do HIV) e bacterianos.

• ELISA competitivo com antígeno marcado: o antígeno presente na amostra compete com um antígeno marcado por um número limitado de sítios de ligação em anticorpos fixados na placa. Quanto mais antígeno na amostra, menos antígeno marcado se liga, resultando em sinal inversamente proporcional.

• ELISA competitivo com anticorpo marcado: o antígeno da amostra compete com um antígeno fixado na placa por um anticorpo marcado. Novamente, a quantidade de antígeno na amostra é inversamente proporcional ao sinal.

• Captura de antígeno: um anticorpo específico é fixado na placa para capturar o antígeno da amostra, que é então detectado por um segundo anticorpo conjugado a enzima. É uma variação do sanduíche, muito usada para detectar antígenos de agentes infecciosos.

Por outro lado, quando o objetivo é pesquisar anticorpos, as modalidades típicas são:

• ELISA indireto: o antígeno é fixado na placa, a amostra (soro do paciente) é adicionada e, se houver anticorpos específicos, eles se ligam ao antígeno. Um anticorpo secundário conjugado a enzima detecta a ligação. É o formato mais comum para sorologia (detecção de IgG e IgM).

• Captura de IgG classe específica: um anticorpo anti-IgG é fixado na placa para capturar toda a IgG da amostra; em seguida, um antígeno marcado é adicionado para detectar IgG específica contra aquele antígeno. É usado para pesquisa de anticorpos IgG.

A pegadinha da questão está em distinguir os ensaios que detectam antígenos daqueles que detectam anticorpos. O candidato que confunde esses conceitos pode marcar alternativas que misturam os dois tipos, como as opções A, B, C e E, que incluem o ELISA indireto ou a captura de IgG classe específica — ambos para pesquisa de anticorpos.

Para fixar, veja a comparação:

Guarde essa fronteira: pesquisa de antígenos = ensaios que usam anticorpos como reagentes para capturar/detectar o antígeno; pesquisa de anticorpos = ensaios que usam antígenos como reagentes para capturar/detectar o anticorpo. É exatamente nessa distinção que as alternativas se dividem.

Alternativa A — ❌ Incorreta

Inclui o ELISA indireto e a captura de IgG classe específica, que são ensaios para pesquisa de anticorpos, não de antígenos. O sanduíche, por sua vez, é um ensaio para antígenos, mas a presença dos dois primeiros torna a alternativa incorreta.

Alternativa B — ❌ Incorreta

Inclui o ELISA indireto, que é um ensaio para pesquisa de anticorpos. Embora o competitivo com antígeno marcado e o sanduíche sejam ensaios para antígenos, a presença do indireto desqualifica a alternativa.

Alternativa C — ❌ Incorreta

Inclui o ELISA indireto e a captura de IgG classe específica, ambos para pesquisa de anticorpos. O competitivo com anticorpo marcado é para antígenos, mas os outros dois tornam a alternativa incorreta.

Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Reúne apenas ensaios para pesquisa de antígenos: o competitivo com antígeno marcado, o competitivo com anticorpo marcado e a captura de antígeno. Todos esses formatos detectam a presença de antígenos na amostra, seja por competição ou por captura direta.

Alternativa E — ❌ Incorreta

Inclui o ELISA indireto, que é um ensaio para pesquisa de anticorpos. A captura de antígeno e o competitivo com anticorpo marcado são para antígenos, mas a presença do indireto torna a alternativa incorreta.

Gabarito: letra D — apenas ensaios para pesquisa de antígenos: competitivo com antígeno marcado, competitivo com anticorpo marcado e captura de antígeno.