GabaritoC — Nucleotídeos 2 e 3.
Gabarito: letra C. No método de Sanger, os nucleotídeos utilizados são os didesoxinucleotídeos (ddNTPs), que se diferenciam dos desoxinucleotídeos normais (dNTPs) por não possuírem o grupo hidroxila (OH) no carbono 3' da pentose. Essa ausência impede a formação da ligação fosfodiéster, terminando a síntese da fita de DNA. Portanto, os nucleotídeos 2 e 3, que representam ddNTPs, são os que poderiam ser utilizados no sequenciamento de Sanger.
O sequenciamento de Sanger, também chamado de método de terminação de cadeia, é uma técnica clássica para determinar a sequência de nucleotídeos de um fragmento de DNA. A chave do método está no uso de nucleotídeos modificados, os didesoxinucleotídeos (ddNTPs). Para entender por que eles funcionam, é preciso compará-los com os nucleotídeos comuns (dNTPs).
Um nucleotídeo é formado por três componentes: um açúcar (pentose), um grupo fosfato e uma base nitrogenada. No DNA, o açúcar é a desoxirribose, que possui átomos de carbono numerados de 1' a 5'. A base nitrogenada liga-se ao carbono 1', o grupo fosfato ao carbono 5', e o carbono 3' possui um grupo hidroxila (OH) que é essencial para a formação da ligação fosfodiéster com o nucleotídeo seguinte. É essa ligação que a DNA polimerase catalisa para estender a cadeia de DNA.
No ddNTP, além da ausência do grupo OH no carbono 3', também falta o grupo OH no carbono 2'. Essa dupla ausência é o que torna o ddNTP um terminador de cadeia: quando ele é incorporado à fita em crescimento, não há grupo OH no carbono 3' para que o próximo nucleotídeo se ligue, e a síntese é interrompida. Essa é a base do método de Sanger: ao adicionar uma pequena quantidade de ddNTPs marcados com fluorescência, a DNA polimerase incorpora aleatoriamente um ddNTP em vez de um dNTP, gerando fragmentos de DNA de diferentes comprimentos, cada um terminando em uma posição específica. A separação desses fragmentos por eletroforese revela a sequência.
A pegadinha da questão está em identificar qual dos nucleotídeos representados é o ddNTP. O nucleotídeo 1, por exemplo, pode representar um dNTP normal (com OH no carbono 3'), enquanto o nucleotídeo 4 pode representar um ribonucleotídeo (com OH no carbono 2' e 3'), que não é utilizado no sequenciamento de DNA. A distinção crucial é a presença ou ausência do grupo OH no carbono 3'.
Guarde essa fronteira: dNTP (com OH no 3') é o bloco de construção normal; ddNTP (sem OH no 3') é o terminador de cadeia usado no sequenciamento de Sanger. É exatamente nessa diferença que as alternativas se dividem.
Afirma que os nucleotídeos 1 e 2 poderiam ser utilizados. O nucleotídeo 1, se for um dNTP normal (com OH no 3'), não é o terminador de cadeia; ele é o nucleotídeo comum que a DNA polimerase adiciona durante a síntese. No sequenciamento de Sanger, os dNTPs são necessários, mas não são os responsáveis pela terminação — essa função é exclusiva dos ddNTPs. Portanto, a combinação 1 e 2 está incorreta.
Afirma que os nucleotídeos 1 e 3 poderiam ser utilizados. O nucleotídeo 1, se for um dNTP, não é o terminador de cadeia. Apenas o nucleotídeo 3, se for um ddNTP, cumpre o papel de terminar a síntese. A combinação 1 e 3 está incorreta porque inclui um nucleotídeo que não é o terminador.
Afirma que os nucleotídeos 2 e 3 poderiam ser utilizados. Se ambos forem ddNTPs (sem o grupo OH no carbono 3'), eles são exatamente os terminadores de cadeia usados no sequenciamento de Sanger. A ausência do grupo OH no carbono 3' impede a formação da ligação fosfodiéster, interrompendo a síntese da fita de DNA. Essa é a característica fundamental dos ddNTPs, que são a chave do método.
Afirma que os nucleotídeos 2 e 4 poderiam ser utilizados. O nucleotídeo 4, se for um ribonucleotídeo (com OH no carbono 2' e 3'), não é utilizado no sequenciamento de DNA, pois o DNA é composto por desoxirribonucleotídeos. Além disso, se o nucleotídeo 4 tiver OH no carbono 3', ele não é um terminador de cadeia. A combinação 2 e 4 está incorreta.
Afirma que os nucleotídeos 3 e 4 poderiam ser utilizados. O nucleotídeo 4, se for um ribonucleotídeo, não é utilizado no sequenciamento de DNA. Apenas o nucleotídeo 3, se for um ddNTP, cumpre o papel de terminador. A combinação 3 e 4 está incorreta porque inclui um nucleotídeo que não é um ddNTP.
A banca explora a confusão entre dNTP e ddNTP. O candidato pode identificar o nucleotídeo 1 como um dNTP normal e o nucleotídeo 4 como um ribonucleotídeo, mas a questão pede especificamente os nucleotídeos que poderiam ser utilizados no método de Sanger — ou seja, os ddNTPs. A ausência do grupo OH no carbono 3' é o critério decisivo, e é exatamente isso que diferencia os nucleotídeos 2 e 3 dos demais.
Para resolver questões sobre sequenciamento de Sanger, foque na estrutura do nucleotídeo: o ddNTP não possui o grupo OH no carbono 3'. Se a figura mostrar um nucleotídeo sem esse grupo, ele é o terminador de cadeia. Lembre-se: dNTP = normal (com OH no 3'), ddNTP = terminador (sem OH no 3').
Gabarito: letra C
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