Questão de Biologia — Aminoacidopatias e Desordens de Proteínas Séricas — VUNESP 2024

Eletroforese de proteínas séricas

Gabarito: letra E. A eletroforese de proteínas do soro humano separa as proteínas em cinco frações clássicas — albumina, alfa-1-globulina, alfa-2-globulina, betaglobulina e gamaglobulina —, que é exatamente o que a alternativa E afirma. As demais alternativas erram ao inverter a relação entre ponto isoelétrico e pH do tampão, ao confundir a carga das proteínas ou ao negar o caráter quantitativo da técnica.

A eletroforese é uma técnica de separação baseada na migração de moléculas carregadas sob a ação de um campo elétrico. No caso das proteínas séricas, a separação ocorre em gel de agarose ou acetato de celulose, e o princípio físico que rege a migração é a carga líquida da proteína, que depende do pH do tampão em relação ao seu ponto isoelétrico (pI). O ponto isoelétrico é o pH no qual a proteína tem carga líquida zero; abaixo dele, a proteína fica carregada positivamente (protonada) e, acima dele, fica carregada negativamente (desprotonada).

As proteínas do soro humano apresentam pontos isoelétricos que variam aproximadamente entre 4,7 e 8,3. Para que todas migrem em um mesmo sentido no campo elétrico, o pH do tampão deve ser superior ao pI da maioria delas, garantindo carga negativa e migração em direção ao polo positivo (ânodo). Na prática, utiliza-se tampão com pH alcalino, em torno de 8,6, o que assegura que praticamente todas as proteínas estejam carregadas negativamente. A albumina, com pI em torno de 4,9, é a que apresenta maior carga negativa nesse pH e, portanto, migra mais rapidamente, aparecendo como a fração mais próxima do ânodo.

A técnica permite não apenas identificar as frações, mas também quantificá-las. Após a corrida eletroforética, as proteínas são coradas e a intensidade da coloração é medida por densitometria, gerando um gráfico com picos correspondentes a cada fração. A área sob cada pico é proporcional à concentração daquela proteína, permitindo determinar tanto as concentrações relativas (percentuais) quanto as absolutas (quando se conhece a proteína total). Por isso, a eletroforese é considerada uma técnica semiquantitativa ou quantitativa, e não meramente qualitativa.

A distinção crucial que separa as alternativas é a relação entre o pH do tampão e o ponto isoelétrico das proteínas. Quando o pH do tampão é maior que o pI, a proteína fica negativa e migra para o ânodo; quando é menor, fica positiva e migra para o cátodo. A banca explora exatamente essa inversão: alternativas que afirmam que proteínas com pI baixo migram menos, ou que pH alto deixa as proteínas positivas, estão invertendo a lógica da técnica. Guarde essa fronteira: pH do tampão acima do pI → carga negativa → migração para o polo positivo; pH abaixo do pI → carga positiva → migração para o polo negativo.

Alternativa A — ❌ Incorreta

Afirma que o tampão deve ter pH entre 7,0 e 8,3 para permitir a separação de todas as proteínas. O erro está na faixa de pH proposta: se o tampão tiver pH entre 7,0 e 8,3, algumas proteínas com pI acima desse pH (como a gamaglobulina, com pI em torno de 8,3) ficariam com carga líquida próxima de zero ou positiva, comprometendo a migração uniforme. Na prática, o pH do tampão deve ser superior ao pI da maioria das proteínas, em torno de 8,6, para garantir que todas estejam carregadas negativamente e migrem para o ânodo. A faixa sugerida na alternativa não assegura a separação adequada de todas as frações.

Alternativa B — ❌ Incorreta

Afirma que, com pH acima de 8,3, todas as proteínas ficam carregadas positivamente e migram para o polo negativo. Isso é exatamente o oposto do que ocorre: quando o pH do tampão é maior que o ponto isoelétrico, a proteína perde prótons e fica com carga líquida negativa, migrando para o polo positivo (ânodo). A alternativa inverte a relação entre pH e carga — é a pegadinha clássica da banca. Com pH acima de 8,3, as proteínas séricas (cujos pIs variam de 4,7 a 8,3) estarão, em sua maioria, carregadas negativamente e migrarão para o polo positivo.

Alternativa C — ❌ Incorreta

Afirma que a albumina, por ter ponto isoelétrico menor que 4,7, migrará menos e mais lentamente. Há dois erros: primeiro, o pI da albumina é em torno de 4,9, não menor que 4,7; segundo, e mais importante, a lógica está invertida. Quanto menor o pI de uma proteína, maior será sua carga negativa em um pH alcalino fixo (como 8,6), e portanto maior será sua mobilidade eletroforética. A albumina, por ter o menor pI entre as proteínas séricas, é a que migra mais rapidamente, aparecendo como a fração mais próxima do ânodo. A alternativa inverte a relação entre pI e velocidade de migração.

Alternativa D — ❌ Incorreta

Afirma que a eletroforese de proteínas do soro é uma determinação qualitativa e que não permite determinar concentrações relativas nem absolutas. Isso é falso: após a corrida, as frações são coradas e quantificadas por densitometria, e a área sob cada pico é proporcional à concentração da proteína. A técnica permite determinar tanto as concentrações relativas (percentual de cada fração) quanto as absolutas (multiplicando o percentual pela proteína total). Portanto, a eletroforese é uma técnica quantitativa ou semiquantitativa, e não meramente qualitativa.

Alternativa E — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Afirma corretamente que a eletroforese de proteínas do soro humano permite identificar cinco frações: albumina, alfa-1-globulina, alfa-2-globulina, betaglobulina e gamaglobulina. Essa é a descrição clássica do proteinograma, que separa as proteínas séricas em cinco bandas ou picos distintos, cada um correspondendo a um grupo de proteínas com mobilidade eletroforética semelhante. A albumina é a fração mais abundante e mais rápida; as globulinas aparecem em seguida, em ordem decrescente de mobilidade: alfa-1, alfa-2, beta e gama. Essa separação é a base para o diagnóstico de diversas condições clínicas, como inflamações, deficiências imunológicas e síndromes nefróticas.

Gabarito: letra E