Questão de Biologia — Métodos de Identificação de Bactérias — VUNESP 2025

Coloração de Gram e a identificação de bactérias

Gabarito: letra E. Na coloração de Gram, bactérias Gram-positivas, como os lactobacilos do iogurte, retêm o cristal violeta e adquirem coloração roxa (violeta). Isso ocorre porque a espessa camada de peptideoglicano de sua parede celular impede a saída do complexo cristal violeta-iodo durante a etapa de descoloração com álcool ou acetona.

A coloração de Gram é uma técnica diferencial fundamental em microbiologia, desenvolvida pelo médico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Ela permite classificar as bactérias em dois grandes grupos — Gram-positivas e Gram-negativas — com base na estrutura química e física de sua parede celular, o que tem enorme importância diagnóstica e terapêutica, pois orienta a escolha de antibióticos.

O procedimento envolve quatro etapas sequenciais: (1) aplicação do corante primário cristal violeta (todas as bactérias ficam roxas); (2) adição do lugol (iodo), que forma um complexo cristal violeta-iodo de grande tamanho molecular; (3) descoloração com álcool ou acetona, o passo crítico da técnica; e (4) aplicação do corante de contraste, a fucsina ou safranina (vermelho/rosa).

A diferença crucial está na parede celular. As bactérias Gram-positivas possuem uma parede espessa, composta por muitas camadas de peptideoglicano (cerca de 20 a 80 nm), que retém o complexo cristal violeta-iodo mesmo após a descoloração, permanecendo roxas. Já as Gram-negativas têm uma parede delgada de peptideoglicano (2 a 7 nm) e uma membrana externa rica em lipopolissacarídeos; o álcool dissolve essa membrana externa e permeabiliza a parede fina, permitindo que o complexo seja lavado, de modo que as bactérias ficam incolores e, ao receberem o corante de contraste, adquirem coloração vermelha ou rósea.

No caso específico do enunciado, os lactobacilos são bactérias Gram-positivas, amplamente utilizadas na fabricação de iogurtes e outros produtos fermentados. Portanto, após a coloração de Gram, eles se apresentam roxos (violeta).

A pegadinha da banca está em associar a cor vermelha/rosa às bactérias Gram-positivas, quando na verdade essa coloração é característica das Gram-negativas, que não retêm o cristal violeta e são coradas pela fucsina ou safranina no passo final.

Alternativa A — ❌ Incorreta

A coloração vermelha é típica das bactérias Gram-negativas, que perdem o cristal violeta na descoloração e são coradas pela fucsina ou safranina. Os lactobacilos, sendo Gram-positivos, não adquirem essa cor.

Alternativa B — ❌ Incorreta

A coloração verde não faz parte do esquema clássico da coloração de Gram. Essa cor é utilizada em outras técnicas, como a coloração de verde-malaquita para esporos bacterianos, mas não é o resultado esperado para bactérias Gram-positivas nesta técnica.

Alternativa C — ❌ Incorreta

A coloração marrom não é um resultado da coloração de Gram. Não há corante marrom no procedimento padrão (cristal violeta, lugol, álcool e fucsina/safranina).

Alternativa D — ❌ Incorreta

A coloração rósea é o resultado para bactérias Gram-negativas, que não retêm o cristal violeta e são coradas pelo corante de contraste (fucsina ou safranina). Os lactobacilos, Gram-positivos, permanecem roxos.

Alternativa E — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Bactérias Gram-positivas, como os lactobacilos, possuem parede celular espessa de peptideoglicano que retém o complexo cristal violeta-iodo durante a descoloração, permanecendo com a coloração roxa (violeta). É exatamente o que o enunciado descreve.

Gabarito: letra E