Questão de Medicina — Doenças Infecto-Parasitárias — FGV 2025
Medicina›Doenças Infecto-Parasitárias
Código
fg116537
Banca
FGV
Órgão
PC-MG
Ano
2025
Nível
Superior
Cargo
Médico Legista
A malária é uma doença infecciosa causada por um parasito do gênero Plasmodium, que é transmitido para humanos pela picada das fêmeas infectadas dos mosquitos Anopheles. Uma das técnicas utilizadas para a detecção desse parasito é o PCR em tempo real (qPCR).As fases dessa técnica contemplam as seguintes etapas:
Adesnaturação, anelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
Banelamento, extensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
Canelamento e extensão.
Ddesnaturação, anelamento e extensão.
Eextensão e aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose.
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GabaritoD — desnaturação, anelamento e extensão.
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PCR em tempo real (qPCR): etapas da reação
Gabarito: letra D. O PCR em tempo real (qPCR) é uma técnica de biologia molecular que amplifica e quantifica simultaneamente o DNA alvo, e suas etapas fundamentais são desnaturação, anelamento e extensão — exatamente o que a alternativa D descreve. As demais alternativas erram ao incluir a "aplicação do produto em gel de agarose", que não faz parte do qPCR, pois a detecção é feita em tempo real por fluorescência, sem necessidade de eletroforese.
O PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) é uma técnica que permite amplificar milhões de cópias de um segmento específico de DNA. No qPCR, além da amplificação, há a quantificação em tempo real, monitorando a fluorescência emitida a cada ciclo. As três etapas térmicas que se repetem em cada ciclo são:
Desnaturação: aquecimento (~94-95°C) para separar as duas fitas do DNA, quebrando as pontes de hidrogênio.
Anelamento: resfriamento (~50-65°C) para que os iniciadores (primers) se liguem às sequências complementares nas fitas simples.
Extensão: aquecimento (~72°C) para que a DNA polimerase sintetize a nova fita a partir dos primers, usando os nucleotídeos livres.
Essas três etapas constituem um ciclo, que se repete de 25 a 40 vezes, resultando em amplificação exponencial do DNA alvo. No qPCR, a detecção é feita por sondas fluorescentes (como TaqMan) ou corantes intercalantes (como SYBR Green), que emitem fluorescência proporcional à quantidade de DNA amplificado. Isso elimina a necessidade de eletroforese em gel, que é uma etapa de análise do PCR convencional (qualitativo), não do qPCR.
A pegadinha da questão está em associar o PCR em tempo real à eletroforese em gel de agarose, que é uma técnica de visualização do produto de PCR convencional. No qPCR, a quantificação é contínua e automatizada, dispensando essa etapa. Portanto, a alternativa correta é a que lista apenas as três etapas térmicas.
1Desnaturação (~95°C)
2Anelamento (~50-65°C)
3Extensão (~72°C)
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Alternativa A — ❌ Incorreta
Inclui a "aplicação do produto da reação de PCR em tempo real no gel de agarose", o que é incorreto. No qPCR, a detecção é feita em tempo real por fluorescência, sem necessidade de eletroforese. A eletroforese em gel é usada no PCR convencional para visualizar o produto final, mas não é uma etapa do qPCR.
Alternativa B — ❌ Incorreta
Omite a etapa de desnaturação, que é essencial para separar as fitas de DNA e permitir o anelamento dos primers. Sem a desnaturação, a reação não pode ocorrer. Além disso, inclui a eletroforese em gel, que não faz parte do qPCR.
Alternativa C — ❌ Incorreta
Lista apenas "anelamento e extensão", omitindo a desnaturação. As três etapas são obrigatórias em cada ciclo do PCR, e a ausência de qualquer uma delas inviabiliza a amplificação.
Alternativa D — ✅ Correta ⟵ GABARITO
Descreve corretamente as três etapas do PCR em tempo real: desnaturação, anelamento e extensão. Essas etapas se repetem ciclicamente para amplificar o DNA alvo, e a detecção é feita em tempo real por fluorescência, sem necessidade de gel de agarose.
Alternativa E — ❌ Incorreta
Inclui apenas "extensão e aplicação do produto em gel de agarose", omitindo as etapas de desnaturação e anelamento, que são fundamentais. Além disso, a eletroforese em gel não é utilizada no qPCR.