Questão de Biologia — Geral — FEPESE 2023
BiologiaGeral
- Código
- qa452260
- Banca
- FEPESE
- Órgão
- EPAGRI SC
- Ano
- 2023
- Cargo
- Ag APER ( )
Assinale a alternativa correta com relação à técnica de PCR em tempo real.
- AO CT (Cycle Threshold) é o ponto em que se atinge o valor limite de fluorescência do fluoróforo repórter, separando os sinais de amplificação específica do “ruído de fundo” do sistema. A emissão de fluorescência aumenta na proporção inversa da quantidade de produtos da PCR.
- BEssa técnica possibilita o uso de sondas específicas acopladas a fluoróforos de escolha oucorantes fluorescentes intercalantes de DNA, como o Sybergreen®. Sendo a primeira técnica menos específica que a segunda.
- CO tamanho do fragmento amplificado (amplicon) deve estar entre 150-600 pb para a eficiência ideal da reação de PCR em tempo real. Oligonucleotídeos que geram um fragmento menor podem resultar em baixa eficiência de amplificação.
- DA sequência de um oligonucleotídeo iniciador (primer) não deve apresentar autocomplementaridade, nem deve apresentar complementaridade com outros oligonucleotídeos presentes em uma reação multiplex. Complementaridade nas extremidades 3’ deve ser especialmente evitada.
- ENo processo de amplificação, a sonda com fluoróforo é degradada devido à atividade exonucleásica 3’ - 5’ da Taq DNA polimerase, separando- se o quencher da molécula fluorescente durante a etapa da extensão. Isto resulta em um aumento da intensidade da fluorescência.