Questão de Biologia — Geral — FEPESE 2023

Desde a identificação do DNA como a unidade da hereditariedade e a base para o dogma central da biologia molecular de que o DNA produz o RNA e o RNA produz as proteínas, os cientistas têm buscado experimentos e métodos para entender como o DNA controla a hereditariedade. Com a descoberta de ferramentas de biologia molecular, como enzimas de restrição, sequenciamento de DNA e clonagem de DNA, os cientistas rapidamente se voltaram para experimentos para alterar o DNA cromossômico em células e animais. Nesse sentido, experimentos iniciais que envolviam a co-incubação de DNA viral com linhagens celulares cultivadas evoluíram para o uso de marcadores selecionáveis em plasmídeos. Métodos de entrega para integração aleatória de DNA progrediram de transfecção por co-incubação física de DNA com células cultivadas, para eletroporação e microinjeção de células cultivadas. Além disso, o uso de vírus para fornecer DNA a células cultivadas progrediu em conjunto com métodos físicos de fornecimento de DNA às células.

Identifique abaixo as afirmativas verdadeiras ( V ) e as falsas ( F ) a respeito da tecnologia do DNA recombinante e de suas técnicas e aplicações.

( ) As enzimas de restrição podem ser encaradas como um sistema de defesa bacteriano que degrada DNA que lhe é estranho. A bactéria protege seu próprio DNA dessa degradação através da metilação de algumas bases específicas. Como consequência, esse sistema é frequentemente descrito como fenômeno da restrição/modificação e existe em um grande número de bactérias.

( ) As enzimas de restrição mais importantes na Tecnologia do DNA Recombinante são proteínas monoméricas ou diméricas e clivam o DNA no mesmo sítio do seu reconhecimento. O sítio de reconhecimento desse tipo de enzima é normalmente uma sequência palindrômica, isto é, ela tem um eixo de simetria e a sequência de bases de uma fita é a mesma da fita complementar, quando lida na direção oposta.

( ) A DNA ligase promove a ligação dos fragmentos de DNA em vetores previamente clivados por endonucleases de restrição; para isso, requer um grupo OH livre na extremidade 5’ de uma das cadeias de DNA e um grupo fosfato na extremidade 3’ da outra cadeia. DNA ligase  isolada de E. coli e de outras bactérias requer ATP como cofator.

( ) Um plasmídeo para ser um bom vetor de clonagem deve possuir uma origem de replicação (O), permitindo que o vetor seja replicado na célula hospedeira; além de apresentar dois ou mais sítios únicos de clivagem para endonucleases de restrição, o local onde o inserto é incorporado ao vetor de clonagem; possuir um gene que codifica um produto, que distingue a célula transformada da célula não transformada, muitos vetores de clonagem carregam o gene que confere resistência à ampicilina (AmpR).

( ) A descoberta de promotores e repressores específicos do genoma de E.coli, de uma variedade de vírus de E.coli e de células eucarióticas, permitiu a manipulação da expressão de proteínas e a clonagem de genes sob o controle de um dado promotor, cuja expressão pode ser indutível ou contínua. O primeiro, e mais comumente utilizado, sistema de expressão de proteínas heterólogas em E.coli é baseado no operon lac.

Assinale a alternativa que indica a sequência correta, de cima para baixo.