Questão de Veterinária — Procedimentos e Aparelhos de Análise Diferenciados — FIOCRUZ 2024
VeterináriaProcedimentos e Aparelhos de Análise Diferenciados
- Código
- qg146775
- Banca
- FIOCRUZ
- Órgão
- FIOCRUZ
- Ano
- 2024
- Nível
- Superior
- Cargo
- Tecnologista em Saúde Pública - Plataforma tecnológica de caracterização de proteínas e citometria de fluxo
Joana, tecnologista da Fiocruz PE, recebeu a demanda de determinar a constante de dissociação em equilíbrio termodinâmico (Kd) decorrente da associação entre duas proteínas providas por grupo de pesquisa da própria instituição. Essas proteínas correspondem a uma proteína sintética de superfície de Leishmania infantum (com 30 kDa) e a um anticorpo monoclonal da classe IgG anti-Leishmania (adquirido comercialmente). Para atingir seu objetivo, Joana resolveu utilizar a técnica de ressonância plasmônica de superfície (do inglês surface plasmon resonance – SPR). Considerando a situação hipotética descrita, Joana deve:
- Aescolher livremente se irá imobilizar a proteína sintética de Leishmania infantum ou o anticorpo IgG na superfície do sensor, pois essa escolha não afetará o valor de Kd.
- Bimobilizar o anticorpo IgG no sensor com nível alvo de 50 RU (unidades de ressonância, do inglês resonance units) a fim de atingir a capacidade teórica máxima de ligação do analito (Rmax) de 20 RU.
- Cimobilizar a proteína sintética de Leishmania infantum no sensor com nível alvo de 70 RU a fim de atingir Rmax de 30 RU.
- Dobservar atentamente o sensorgrama e, caso este apresente padrão de associação linear, ela deverá aplicar o modelo isotérmico de Langmuir para calcular as constantes de associação (Kon) e dissociação (Koff).
- Ereduzir o fluxo de injeção do analito e aumentar a densidade do ligante na superfície do sensor, caso ela observe limitação de transporte de massa.