Questão de Biologia — Moléculas, células e tecidos — FEPESE 2026

Precipitação de DNA com etanol e sal catiônico

Gabarito: letra B. O etanol absoluto, em presença de alta concentração de sal catiônico (como acetato de sódio ou amônio), desidrata e neutraliza as cargas negativas do DNA, fazendo com que as moléculas se agreguem e precipitem — concentrando o ácido nucleico e permitindo a remoção de contaminantes como fenol e clorofórmio. Esse é o princípio clássico da precipitação alcoólica, amplamente usado em protocolos de extração de DNA.

A precipitação por etanol é uma etapa fundamental na purificação de ácidos nucleicos. O DNA é um polímero altamente hidrofílico, com grupos fosfato carregados negativamente ao longo da cadeia. Em solução aquosa, essas cargas são estabilizadas por uma camada de moléculas de água (hidratação). Quando se adiciona etanol absoluto, reduz-se drasticamente a atividade da água, e o sal catiônico (por exemplo, Na⁺ ou NH₄⁺) neutraliza as cargas negativas dos fosfatos, diminuindo a repulsão eletrostática entre as moléculas. O resultado é a agregação e precipitação do DNA, que se torna insolúvel no meio alcoólico e forma um pellet após centrifugação.

Essa técnica não desnatura o DNA de forma irreversível nem rompe ligações fosfodiéster — pelo contrário, o DNA precipitado pode ser ressuspendido em água ou tampão e permanece íntegro para análises posteriores (PCR, sequenciamento, digestão enzimática etc.). Além disso, a precipitação ajuda a remover contaminantes como proteínas, fenol e clorofórmio, que permanecem no sobrenadante enquanto o DNA sedimenta. É por isso que a alternativa B está correta: ela descreve exatamente o papel do etanol na precipitação.

A pegadinha da banca está em confundir precipitação com desnaturação ou com processos enzimáticos. A precipitação alcoólica é um fenômeno físico-químico de solubilidade, não uma alteração estrutural permanente. O DNA mantém sua dupla hélice e suas ligações fosfodiéster intactas após a precipitação — o que muda é apenas o estado de hidratação e a carga superficial, que o tornam insolúvel no meio alcoólico.

Alternativa A — ❌ Incorreta

Afirma que o etanol causa desnaturação irreversível do DNA, com rompimento das ligações fosfodiéster e degradação completa. Isso é falso por dois motivos: (1) o etanol não rompe ligações fosfodiéster — essas ligações são covalentes e só são quebradas por nucleases ou condições extremas (ácido, calor intenso); (2) a desnaturação do DNA (separação das fitas) é reversível e não é o objetivo da precipitação. O etanol apenas desidrata e neutraliza cargas, promovendo agregação, sem danificar a molécula.

Alternativa B — ✅ Correta ⟵ GABARITO

Descreve corretamente o efeito do etanol: agregação e precipitação dos ácidos nucleicos, concentrando o DNA e auxiliando na remoção de resíduos de fenol e clorofórmio. O sal catiônico neutraliza as cargas negativas dos fosfatos, e o etanol reduz a hidratação, fazendo o DNA precipitar. Esse é o princípio da precipitação alcoólica, amplamente utilizado em protocolos de extração e purificação de DNA.

Alternativa C — ❌ Incorreta

Afirma que o etanol promove amplificação seletiva do DNA mediada pelo sal catiônico, dispensando etapas de extração e purificação. Isso é um absurdo: a precipitação não amplifica DNA — amplificação é feita por PCR (reação em cadeia da polimerase), que requer enzimas (Taq polimerase), primers e ciclos térmicos. O sal e o etanol apenas precipitam o DNA; não há qualquer relação com amplificação. Além disso, a precipitação é uma etapa de purificação, não a dispensa dela.

Alternativa D — ❌ Incorreta

Afirma que o etanol converte diretamente o DNA em RNA mensageiro solúvel. Isso é biologicamente impossível: a conversão de DNA em RNA é feita pela transcrição, um processo enzimático que ocorre no núcleo celular, mediado pela RNA polimerase. O etanol não tem atividade catalítica e não participa de processos de transcrição. Além disso, o RNA mensageiro não é "solúvel" por ação do etanol — o etanol, na verdade, precipita ácidos nucleicos, não os solubiliza.

Alternativa E — ❌ Incorreta

Afirma que o etanol ativa nucleases dependentes de etanol absoluto, promovendo digestão controlada do DNA. Não existem nucleases ativadas por etanol; as nucleases são enzimas que degradam ácidos nucleicos e geralmente são inibidas por etanol (que desidrata e precipita o DNA, protegendo-o da ação enzimática). Na verdade, o etanol é usado para precipitar e preservar o DNA, não para digeri-lo. A digestão controlada do DNA é feita por enzimas de restrição, que não dependem de etanol.

Gabarito: letra B